分子診斷技術(shù)在結(jié)核病診治中的應(yīng)用

1、分子診斷技術(shù)在結(jié)核病診治中的應(yīng)用,武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)中心李 艷,全球結(jié)核病流行狀況,WHO report，2013,,全球結(jié)核病流行狀況,,全球結(jié)核感染人數(shù)2004年后處于下降趨勢(shì)HIV患者并發(fā)結(jié)核病數(shù)量處于平穩(wěn)階段中國(guó)結(jié)核感染人數(shù)全球排名第二,WHO report，2013,全球結(jié)核病流行狀況,,WHO report，2013,,全球結(jié)核病流行狀況,全球結(jié)核死亡人數(shù)處于下降趨勢(shì)斯威士蘭結(jié)核病感染率最高,WHO repo

2、rt，2013,全球結(jié)核病流行狀況,Globally, an estimated 3.6% of new cases and 20.2% of previously treated cases have MDR-TBThere were an estimated 450,000 new cases of MDR-TB worldwide in 2012On average, an estimated 9.6% of MDR-TB c

3、ases have XDR-TB,WHO report，2013,全球結(jié)核病流行狀況,2012年全球新發(fā)結(jié)核病例為860萬(wàn)人，中國(guó)占總數(shù)的12%在860萬(wàn)新病例中約110萬(wàn)人（13%）為HIV陽(yáng)性，這些病例的75%在非洲 每年約有130萬(wàn)人死于結(jié)核病，我國(guó)為25萬(wàn) 結(jié)核病每24秒鐘就殺死1人 預(yù)計(jì)未來(lái)20年還將有3600萬(wàn)人死于結(jié)核病。 全球每年有45萬(wàn)新發(fā)MDR-TB，大約4.3萬(wàn)為 XDR-TB,“4多”,WHO re

4、port，2013,,,,,,,,,,結(jié)核病診治中存在的問(wèn)題,,,,,,,預(yù)防問(wèn)題,,診斷問(wèn)題,治療問(wèn)題,醫(yī)療問(wèn)題,檢驗(yàn)人員最關(guān)心的問(wèn)題,根據(jù)不同分子水平及技術(shù)特點(diǎn)來(lái)選擇診斷檢測(cè)體系,方法選擇,方法選擇的影響因素,Sputum,,涂片,MTB培養(yǎng)—孵育4-8周（陽(yáng)性）,藥敏試驗(yàn)—觀(guān)察 孵育4周觀(guān)察生長(zhǎng)情況,涂片 （陽(yáng)性）,分子診斷技術(shù),液體培養(yǎng)及藥敏試驗(yàn),,,,,,平均時(shí)間2-3個(gè)月,,平均時(shí)間20天,,只需2小時(shí)-2天,涂陽(yáng)=6

5、0-98%有結(jié)核分枝桿菌，因此涂陽(yáng)后最好用分子生物學(xué)方法進(jìn)行快速鑒定,,,擴(kuò)增 雜交,LAMP、SDA,芯片、RT-PCR,,,SAT、TMA,FISH、Probe,分子診斷適宜技術(shù)的選擇,T-SPOT.TB與 QFT-GI為IGRAs實(shí)驗(yàn),結(jié)核菌素試驗(yàn)（TST）,T-SPOT.TB,QuantiFERON-TB Gold in-tube (QFT-GI),,蛋白質(zhì)水平,全血IFN-γ釋放分析技術(shù)(IGRA)

6、,結(jié)核感染者體內(nèi)存在特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞，效應(yīng)T淋巴細(xì)胞再次受到結(jié)核抗原刺激時(shí)會(huì)分泌多種細(xì)胞因子（IFN-γ）。因此，檢測(cè)效應(yīng)T淋巴細(xì)胞可用于結(jié)核病或結(jié)核潛伏感染者的診斷。由于效應(yīng)T細(xì)胞存活時(shí)間很短，而且具有特異性，因此可以作為機(jī)體是否正處于被感染的指標(biāo)，無(wú)論是否有臨床癥狀。基于IGRA原理的產(chǎn)品目前已被美國(guó)、加拿大、英國(guó)、德國(guó)、意大利、瑞士、法國(guó)、荷蘭、日本等二十余個(gè)國(guó)家寫(xiě)入本國(guó)的結(jié)核診療指南中,,,γ-干擾素釋放實(shí)驗(yàn),酶聯(lián)免疫斑

7、點(diǎn)技術(shù),培養(yǎng)濾液蛋白10（CFP 10）,早期抗原靶6（ESAT-6）,,,,一、T-SPOT技術(shù)基礎(chǔ),T-SPOT,由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丟失該基因序列絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌也不存在RD1區(qū),結(jié)核桿菌特異抗原,,ESAT-6與CFP 10抗原,,PlamaPBMCsGel BarrierErythrocytes,,,檢測(cè)過(guò)程,分離PBMCs,加入PBMCs與結(jié)核特異抗原

8、37℃孵育16-20小時(shí),PBMCs特異抗原,Γ-干擾素抗體,加入標(biāo)記二抗，孵育1小時(shí),,加入顯色液，終止反應(yīng),,觀(guān)察結(jié)果：1個(gè)斑點(diǎn)=1個(gè)效應(yīng)T細(xì)胞,結(jié)果判斷圖,,陰性結(jié)果,陽(yáng)性結(jié)果,空白對(duì)照抗原 AESAT-6抗原 BCFP10陽(yáng)性對(duì)照（PHA）,,,,,,,,,,,潛伏性結(jié)核（LTBI）診斷技術(shù)比較,,IGRAs與TST相比，具有更高的靈敏度和特異性IGRAs與BCG, NTM無(wú)交叉反應(yīng)，TST有交

9、叉反應(yīng),難以從感染者中鑒別出活動(dòng)性肺結(jié)核患者小于5歲兒童、免疫力低下患者不適合采用IGRAs檢測(cè)試劑成本非常高,,costs（費(fèi)用） availability for clinicians and other health workers（醫(yī)療水平） patient acceptability（患者是否接受）ease of distribution and storage（實(shí)驗(yàn)平臺(tái)）,,,核酸擴(kuò)增技術(shù),S

10、AT：Simultaneous Amplification and Testing (RNA仁度) CPA: Cross Priming Amplification (DNA/RNA,優(yōu)思達(dá))LAMP:Loop-Mediated Isothermal Amplification (DNA, Japan)TMA: Transcription Mediated Amplification (RNA, Gen-Probe),Gen

11、oType® MTBDRplus：(Hain Lifescience) NASBA: Nucleic Acid Sequence-Based Amplification (RNA,OT) RCA: Rolling Circle Amplification (DNA, Molecular Staging) HDA：Helicase-Dependant Amplification (DNA, Biohelix, NEB),,

12、,,,,,,RNA 拷貝數(shù)≥ DNA拷貝數(shù),,生命力旺盛的病原體RNA轉(zhuǎn)錄活躍,,,,較好的愈后指標(biāo),,,交叉污染少,,TMA、SAT優(yōu)點(diǎn),RNA作為臨床分子診斷靶標(biāo),二、SAT技術(shù),同一溫度下（42℃），以RNA為起始模板，通過(guò)M-MLV反轉(zhuǎn)錄酶產(chǎn)生一個(gè)雙鏈DNA拷貝，然后利用T7 RNA多聚酶從DNA拷貝上產(chǎn)生多個(gè)（100～1000個(gè)）RNA拷貝；每一個(gè)RNA拷貝再?gòu)姆崔D(zhuǎn)錄開(kāi)始進(jìn)入下一個(gè)擴(kuò)增循環(huán)；同時(shí)，帶有熒光標(biāo)記的探針和這些RNA

13、拷貝特異結(jié)合，產(chǎn)生熒光。該熒光信號(hào)可由熒光檢測(cè)儀器實(shí)時(shí)捕獲，直觀(guān)反映擴(kuò)增循環(huán)情況,TB-SAT操作步驟,陽(yáng)性結(jié)果,陰性結(jié)果,恒溫?cái)U(kuò)增 --42°CRNA 檢測(cè) --起始靶標(biāo)與擴(kuò)增產(chǎn)物都是RNA擴(kuò)增產(chǎn)物的污染更少 --RNA環(huán)境中易降解更高的擴(kuò)增效率--30分鐘內(nèi)擴(kuò)增10億倍反應(yīng)穩(wěn)定 -- 抑制物少,高靈敏度、特異性活菌檢測(cè)操作簡(jiǎn)單、快速,,,MTBDRsl-鑒定XDR,MTBDRplus-鑒定MDR,MTBC-鑒定

14、MTB復(fù)合群,MTBCM-鑒定MTB和NTM,分類(lèi),Gene-Probe(TMA/Hain)技術(shù),三、MTBC-鑒定MTB復(fù)合群(TMA技術(shù)),方法名稱(chēng)： HPV（Hybridization Protection Assay）-雜交保護(hù)分析法為Gen-probe公司專(zhuān)利原理： 以rRNA為靶標(biāo)，采用線(xiàn)性探針技術(shù)檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群檢測(cè)設(shè)備： LEADER 50iHPA-MTD(Mycobacteriu

15、m Tuberculosis Direct): 2.5h 報(bào)告，直接從標(biāo)本中檢測(cè)結(jié)核菌HPA-Accuprobe: <1h 報(bào)告，用菌落或自動(dòng)培養(yǎng)系統(tǒng)的菌,樣本,,細(xì)胞溶解,目標(biāo) r-RNA釋放,MTD技術(shù)路線(xiàn),雜交體,rRNA,60°C15分鐘,,加入探針,探針,,雜交,,選擇性試劑,60°C,化學(xué)發(fā)光讀數(shù)儀,,熒光檢測(cè),MTD技術(shù)特點(diǎn),MTD結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)技術(shù)特點(diǎn),采用分子技

16、術(shù)快速鑒定（2.5小時(shí)）結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群標(biāo)本可以是涂片陰性或者陽(yáng)性的痰標(biāo)本；也可以是培養(yǎng)物唯一獲得FDA推薦的凃陰樣本快速檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)RNA，RNA只能來(lái)源于活的細(xì)菌，可鑒定活動(dòng)性結(jié)核病人）采用TMA恒溫?cái)U(kuò)增，不使用PCR儀器，無(wú)需專(zhuān)業(yè)的PCR實(shí)驗(yàn)室認(rèn)證HPA雜交保護(hù)分析技術(shù)：靈敏、特異嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)室防污染技術(shù)：整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程所有試劑和樣本全部在同一個(gè)反應(yīng)管內(nèi)進(jìn)行，杜絕交叉污染,MTD結(jié)核分枝桿菌的直接檢測(cè)意義,TB與其他分枝

17、桿菌區(qū)分 AIDS患者鳥(niǎo)分枝桿菌小腸黏膜感染 龜分枝桿菌引起嚴(yán)重院內(nèi)感染（南方某醫(yī)院）提高TB檢出率 CSF、胸腹水等疑似患者 長(zhǎng)期低熱、ESR持續(xù)增快，排除腫瘤和免疫性疾病患者，做血、痰TB菌MTD檢測(cè),DNA作為臨床分子診斷靶標(biāo),,四、MTBDRplus-鑒定MDR,方法名稱(chēng)： 耐多藥結(jié)核病(MDR-TB)快速診斷為Hain Lifescience公司專(zhuān)利原理： 采用線(xiàn)性探針技術(shù)

18、（Line-Probe或稱(chēng)DNA-Strip）檢測(cè)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群利福平(rpoB)和異煙肼(katG和inhA)等結(jié)核治療藥物的耐藥基因來(lái)判斷TB體內(nèi)耐藥性MTBDRplus: 6h報(bào)告結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群鑒定與耐藥結(jié)果,結(jié)核耐藥的分子機(jī)制,,MTBDRplus技術(shù)路線(xiàn),結(jié)果解釋,野生型：有雜交帶顯色為“+”，表示未發(fā)生突變 耐藥突變位點(diǎn)：有雜交帶顯色為“+”，表示發(fā)生突變 敏感：所有野生型探針“+”和所有耐藥位點(diǎn)探針

19、“-” 耐藥：對(duì)應(yīng)藥物有1條野生型探針“-”或有1條耐藥位點(diǎn)“+”,,,技術(shù)特點(diǎn),MTBDRplus技術(shù),MTBDRplus技術(shù)性能參數(shù),J Clin Microbiol. 2010 Aug;45(8):2635-40. Epub 2007 May 30,MTBDRplus技術(shù)性能參數(shù),,中國(guó)人群存在一定數(shù)量的KatG S315N突變,,WHO、蓋茨基金會(huì)推薦使用的快速線(xiàn)性探針技術(shù)，可以在6小時(shí)內(nèi)給出藥敏鑒定結(jié)果可以做一線(xiàn)結(jié)核藥物（

20、異煙肼 利福平）、二線(xiàn)結(jié)核藥物的耐藥檢測(cè)（乙胺丁醇、氟喹諾酮類(lèi)藥物、可注射結(jié)核藥物）標(biāo)本可是涂片陽(yáng)性的痰標(biāo)本，或是培養(yǎng)物技術(shù)步驟簡(jiǎn)單：核酸提取、PCR擴(kuò)增、核酸雜交儀檢測(cè)每個(gè)試劑條上自帶質(zhì)控：CC雜交質(zhì)控、AC擴(kuò)增質(zhì)控、TUB結(jié)核分枝桿菌質(zhì)控，確保整個(gè)實(shí)驗(yàn)流程的可信度,HAIN-結(jié)核分枝桿菌耐藥快速檢測(cè)系統(tǒng)特點(diǎn),五、交叉引物恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù) (Cross Priming Amplification, CPA),本試劑盒將病原體DN

21、A擴(kuò)增、核酸雜交和核酸試紙條檢測(cè)三種技術(shù)有機(jī)地融為一體，在恒溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中加入兩對(duì)TB特異性引物、一對(duì)特異性探針，同時(shí)一次性完成TB DNA的擴(kuò)增及雜交過(guò)程，然后用3號(hào)一次性核酸檢測(cè)裝置對(duì)TB感染進(jìn)行定性診斷，其檢測(cè)靈敏度為10個(gè)病原體，高特異引物設(shè)計(jì)確保了結(jié)果的可靠性。由于待測(cè)樣本的擴(kuò)增（PCR管蓋和石蠟油雙重保護(hù)）和檢測(cè)過(guò)程均在物理封閉條件下完成，所以本試劑盒具有防止實(shí)驗(yàn)室擴(kuò)增物交叉污染，防止假陽(yáng)性的效果,杭州優(yōu)思達(dá)公司,CPA技術(shù)原

22、理圖,A:引入交叉引物位點(diǎn),B:交叉引物擴(kuò)增,C:檢測(cè)產(chǎn)物,CPA技術(shù)路線(xiàn)圖,,,,,,,,,,,,有色顆粒,抗A抗體,,雙重標(biāo)記的特異性擴(kuò)增物,陽(yáng)性,,,,,Ａ,,,抗Ｂ抗體,,試紙條檢測(cè)結(jié)果判讀原理圖,,Ｂ,,結(jié)果的判讀,陽(yáng)性：試紙條出現(xiàn)兩條紅色條帶，一條位于質(zhì)控區(qū)（C線(xiàn)），一條位于檢測(cè) 區(qū)（T線(xiàn)）且其強(qiáng)度≥L4（與附帶的色卡比較）。表明樣本中含有結(jié)核分枝桿菌，且其水平達(dá)到或超過(guò)本試劑盒的最低檢出限 陰性：試紙條質(zhì)控區(qū)（C線(xiàn)）

23、出現(xiàn)一條紅色條帶，檢測(cè)區(qū)（T線(xiàn)）沒(méi)有條帶或者其強(qiáng)度＜L4（與附帶的色卡比較）。表明樣本中不含結(jié)核分枝桿菌，或其水平低于本試劑盒的最低檢出限 無(wú)效：試紙條質(zhì)控區(qū)（C線(xiàn)）未出現(xiàn)條帶。表明試劑盒已損壞、失效或者操作有誤,恒溫?cái)U(kuò)增-CPA,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,CPA的優(yōu)勢(shì)：快速，簡(jiǎn)單，靈活，穩(wěn)定,Affordable低價(jià): 不需昂貴的設(shè)備和分子實(shí)驗(yàn)室,Sensitive靈敏：10個(gè)菌/ml；與快培比較：87%,Speci

24、fic特異：能鑒別人型和牛型結(jié)核分枝桿菌,User-friendly容易使用：不需PCR儀, 操作簡(jiǎn)單,Rapid/robust快速/穩(wěn)定：樣本到結(jié)果2小時(shí),Equipment-free無(wú)儀器：僅需離心機(jī)、水浴鍋或金屬浴,Deliverable易儲(chǔ)運(yùn)：不需冷鏈運(yùn)輸。裝置可儲(chǔ)存于室溫,,,,ASSURED,,CPA技術(shù)性能參數(shù),,六、環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù) (Loop-Mediated Isothermal Amplifi

25、cation，LAMP ),環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法是日本榮研化學(xué)獨(dú)立研發(fā)的一種“簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確、廉價(jià)”的基因擴(kuò)增方法。它的特征是針對(duì)目標(biāo)DNA鏈上的六個(gè)區(qū)段設(shè)計(jì)四個(gè)不同的引物，然后再利用鏈置換反應(yīng)在一定溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下（60-65）、經(jīng)一個(gè)步驟即可完成。擴(kuò)增效率極高，可在15min-1h內(nèi)實(shí)現(xiàn)109-1010倍的擴(kuò)增。而且由于有著高度的特異性，只需根據(jù)擴(kuò)增反應(yīng)產(chǎn)物的有

26、無(wú)可對(duì)靶基因序列的存在與否作出判斷,不需要使雙鏈DNA先變性成單鏈 擴(kuò)增反應(yīng)在等溫下可持續(xù)進(jìn)行 擴(kuò)增效率極高 針對(duì)六個(gè)區(qū)段使用兩種不同的引物，可特異性擴(kuò)增靶基因序列 僅使用一種鏈置換DNA聚合酶，成本低廉 擴(kuò)增產(chǎn)物是在同一條DNA鏈上互補(bǔ)序列周而復(fù)始形成大小不一的結(jié)構(gòu) 當(dāng)模板是RNA時(shí)，僅需加入逆轉(zhuǎn)錄酶即可與DNA一樣進(jìn)行擴(kuò)增,LAMP技術(shù)原理動(dòng)畫(huà)圖,LAMP方法建立階段所需的試劑,DNA 擴(kuò)增

27、 RNA擴(kuò)增,模板DNA引物FIPF3BIPB3BstDNA 聚合酶dNTPs反應(yīng)緩沖液,模板RNA引物FIPF3BIPB3BstDNA 聚合酶逆轉(zhuǎn)錄酶dNTPs反應(yīng)緩沖液,LAMP技術(shù)結(jié)果判讀原理圖,LAMP法結(jié)果判斷方式?----目視檢查混濁,LAMP法結(jié)果判斷方式?/?----目視檢查綠色熒光/濁度檢測(cè)儀,擴(kuò)增反應(yīng)在等溫條件（60～65℃）下連續(xù)進(jìn)行

28、?可以使用簡(jiǎn)便、廉價(jià)的擴(kuò)增裝置 擴(kuò)增效率高、可在短時(shí)間內(nèi)完成擴(kuò)增 ?可在短時(shí)間內(nèi)得出結(jié)果 有非常高的特異性 ?可得出“擴(kuò)增反應(yīng)發(fā)生=有目的菌存在”的結(jié)論 產(chǎn)生大量擴(kuò)增產(chǎn)物，檢測(cè)方法簡(jiǎn)便 ?無(wú)需用電泳、特殊探針等，可通過(guò)濁度儀、熒光目視 方法確認(rèn)擴(kuò)增結(jié)果 從擴(kuò)增到檢測(cè)可在1個(gè)反應(yīng)試管內(nèi)（封閉系統(tǒng)）完成 ?可防止由于擴(kuò)增產(chǎn)物產(chǎn)生的污染 從RNA經(jīng)一步反應(yīng)可完成擴(kuò)增

29、 ?無(wú)需另外進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng),小結(jié),LAMP技術(shù)特點(diǎn),LAMP技術(shù)的應(yīng)用領(lǐng)域,,,,,,,食品領(lǐng)域?食物中毒致病菌的檢測(cè)?食品的衛(wèi)生管理?食物中毒的防止,臨床領(lǐng)域?病原菌、病毒的檢測(cè)及鑒定?通過(guò)SNP多態(tài)性分型決定用藥量,農(nóng)業(yè)領(lǐng)域?植物病害的早期發(fā)現(xiàn)及蔓延防止?轉(zhuǎn)基因作物的檢測(cè),環(huán)境領(lǐng)域?環(huán)境、水中病原微生物的檢測(cè),工業(yè)領(lǐng)域?工業(yè)產(chǎn)品用大量DNA的生產(chǎn)成為可能,畜牧業(yè)領(lǐng)域?雌雄性別判斷?病原微生物的檢測(cè)?遺傳病的

30、發(fā)現(xiàn),LAMP技術(shù)性能參數(shù),,七、DNA微陣列（基因芯片）技術(shù),DNA微陣列或芯片技術(shù)是利用光導(dǎo)化學(xué)合成、照相平板印刷以及固相表面化學(xué)合成等技術(shù)，在固相表面合成成千上萬(wàn)個(gè)寡核苷酸探針，或?qū)⒁合嗪铣傻奶结樣晌㈥嚵衅骰驒C(jī)器人點(diǎn)樣于尼龍膜或硅片上，再與放射性同位素或熒光物標(biāo)記的DNA或cDNA雜交，用于分析DNA突變及多態(tài)性、DNA測(cè)序、監(jiān)測(cè)同一組織細(xì)胞在不同狀態(tài)下多種組織細(xì)胞基因表達(dá)水平的差異、發(fā)現(xiàn)新的致病基因或疾病相關(guān)基因等多個(gè)研究領(lǐng)域,

31、博奧生物,基因芯片技術(shù)操作流程,,,,,樣品制備,試劑配制,雜交,激光共焦掃描,軟件判讀,分枝桿菌菌種鑒定試劑盒（DNA微陣列芯片法）同時(shí)快速檢測(cè) 17 種分枝桿菌：結(jié)核、胞內(nèi)、鳥(niǎo)、戈登、堪薩斯、偶然、瘰疬、淺黃、土、龜-膿腫、草、不色、海-潰瘍、金色、蘇爾加、蟾蜍及恥垢。分離株或者痰樣本均可檢測(cè)。 通 量：同時(shí)檢測(cè) 17 種分枝桿菌速 度：6小時(shí) versus 傳統(tǒng) 4 周靈敏度： 103 CFU/反應(yīng)特異性

32、：防污染體系；對(duì)照設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)；自動(dòng)判讀結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒（DNA微陣列芯片法）基于rpoB/katG/inhA的基因突變，快速檢測(cè)分離株或者痰樣本中結(jié)核分枝桿菌多藥耐藥（利福平、異煙肼）通 量：兩種一線(xiàn)抗結(jié)核藥物、8個(gè)突變位點(diǎn)速 度：6小時(shí)versus 傳統(tǒng) 4~8 周靈敏度： 103 CFU/反應(yīng)特異性：防污染體系；對(duì)照設(shè)計(jì)嚴(yán)謹(jǐn)；自動(dòng)判讀,基因芯片技術(shù)特點(diǎn),基因芯片技術(shù)性能參數(shù),分枝桿菌菌種鑒定試劑盒（

33、DNA微陣列芯片法） 結(jié)核分枝桿菌耐藥基因檢測(cè)試劑盒（DNA微陣列芯片法） （基因芯片診斷耐多藥結(jié)核病的臨床多中心研究） 基因芯片檢測(cè)和DNA測(cè)序結(jié)果的符合率為100%絕對(duì)濃度法藥敏結(jié)果作為標(biāo)準(zhǔn)，基因芯片法檢測(cè)利福平、異煙肼耐藥和耐多藥的符合率分別是93.7