真菌侵染誘導(dǎo)沉香形成關(guān)鍵技術(shù)效果評(píng)價(jià)及結(jié)香機(jī)制初步研究.pdf

1、沉香是瑞香科植物白木香（Aquilaria sinensis (Lour.)Gilg）含樹(shù)脂的木材，是我國(guó)、印度及其他東南亞國(guó)家的傳統(tǒng)名貴中藥，具有行氣止痛、納氣平喘、溫中止嘔的功效。
　　 同時(shí)，其具有濃郁而獨(dú)特的香氣，故常被用來(lái)制造高級(jí)香水、高級(jí)香皂、高級(jí)香精等。
　　 白木香是國(guó)產(chǎn)沉香的唯一植物資源，其樹(shù)干在受到損傷或刺激的情況下才能分泌沉香樹(shù)脂，但這需要十幾年甚至幾十年的累積。天然沉香的偶然性及長(zhǎng)周期性已遠(yuǎn)不能滿

2、足市場(chǎng)需求，人們便開(kāi)始使用各種人工促香方法促進(jìn)白木香結(jié)香并且從未間斷對(duì)沉香形成機(jī)制的探索。
　　 黑色樹(shù)脂形成于沉香屬植物的心材部位，為了找出含有樹(shù)脂的木材需要砍倒樹(shù)干，導(dǎo)致大量白木香樹(shù)遭人為砍伐。白木香本身因木材松軟既沒(méi)有藥用價(jià)值也無(wú)法當(dāng)建材用，砍伐的白木香樹(shù)及其葉、果皮、種子等均被作為廢物處理。本實(shí)驗(yàn)對(duì)白木香葉、果皮、種子以及結(jié)香部位的化學(xué)成分進(jìn)行了全面分析，在白木香果皮中首次檢出大量沉香的特征性成分：芳香族化合物、倍半萜類(lèi)

3、和色酮類(lèi)，發(fā)現(xiàn)白木香果皮提取物表現(xiàn)出良好的抗腫瘤活性。這為全面合理開(kāi)發(fā)利用白木香植物資源奠定了研究基礎(chǔ)。
　　 雖然白木香結(jié)香機(jī)制尚未明確，但普遍認(rèn)為與其內(nèi)生真菌有著密切關(guān)系。本課題組使用新的“生物法”—無(wú)創(chuàng)傷的“小孔滴注法”。無(wú)創(chuàng)傷方法既可排除白木香樹(shù)干組織受到大面積的物理傷害，又能避免外源環(huán)境微生物對(duì)樹(shù)干組織的侵染，從而保障了真菌對(duì)沉香誘導(dǎo)作用研究結(jié)果的可靠性。為了使“小孔滴注法”人工接種沉香既能實(shí)現(xiàn)快速結(jié)香又能讓其品質(zhì)達(dá)到

4、藥典的要求，運(yùn)用GC-MS分析技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)研究白木香結(jié)香過(guò)程中化學(xué)成分和結(jié)香前后內(nèi)生真菌群落構(gòu)成的動(dòng)態(tài)變化，得出一定的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律并篩選出可快速誘導(dǎo)沉香形成的優(yōu)勢(shì)菌株；同時(shí)，建立了測(cè)定沉香中芐基丙酮含量的氣相色譜法，為沉香質(zhì)量全面評(píng)價(jià)體系奠定基礎(chǔ)。
　　 鐮刀菌屬于子囊菌亞門(mén)，它是大部分白木香分離培養(yǎng)研究中均獲得的常見(jiàn)內(nèi)生真菌，我們也從白木香中分離到了，因此選擇鐮刀菌進(jìn)行人工造香試驗(yàn)。建立了“小孔滴注法”人工造香21個(gè)月

5、白木香葉內(nèi)生真菌rDNA ITS 區(qū)克隆文庫(kù)，共獲得28 條序列，分屬刺盤(pán)孢屬、擬盤(pán)多毛孢屬、擬莖點(diǎn)霉菌、球座菌屬、曲霉屬、核盤(pán)霉屬、子囊菌等。其中刺盤(pán)孢屬、擬盤(pán)多毛孢屬、擬莖點(diǎn)霉菌為較優(yōu)勢(shì)菌，分別占文庫(kù)的35.7％、10.7％、7.14％。而健康白木香（未結(jié)香）葉內(nèi)生真菌rDNA ITS 區(qū)克隆文庫(kù)，得到10條序列，分屬刺盤(pán)孢屬、球腔菌屬、枝氯霉屬等。二者均具有的內(nèi)生真菌群落只有刺盤(pán)孢屬（Collectrotrichum），說(shuō)明白木香