轉(zhuǎn)染p53siRNA對(duì)高糖損傷的腎小球足細(xì)胞泛素化通路及細(xì)胞凋亡影響.pdf

1、目的：本研究體外培養(yǎng)小鼠腎小球足細(xì)胞,通過(guò)轉(zhuǎn)染p53 siRNA,觀(guān)察高糖環(huán)境中的腎小球足細(xì)胞凋亡和泛素化通路的變化,以明確p53及COP1介導(dǎo)的p53泛素化降解在高水平葡萄糖誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用,進(jìn)一步探明糖尿病腎病的可能發(fā)病機(jī)制。
　　 方法：體外培養(yǎng)小鼠腎小球足細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組、高糖組、甘露醇組、p53 siRNA質(zhì)粒組、p53 siRNA質(zhì)粒陰性對(duì)照組。TUNEL法檢測(cè)腎小球足細(xì)胞凋亡的改變,RT-PCR和

2、western blot法分別檢測(cè)腎小球足細(xì)胞p53、COP1和casepase-3的mRNA和蛋白的表達(dá)改變。
　　 結(jié)果：⑴高糖刺激足細(xì)胞48h后凋亡率(14.4±1.67)％分別是對(duì)照組(3.00±1.00)%和p53 siRNA質(zhì)粒組(5.60±1.67)%的4.8倍和2.6倍,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);甘露醇組(14.8±2.28)%和p53 siRNA質(zhì)粒陰性對(duì)照組(15.6±2.97)%與高糖組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)

3、意義(P＞0.05)。⑵高糖刺激足細(xì)胞48h后其p53 mRNA表達(dá)水平(1.2351±0.1005)較對(duì)照組(0.5085±0.0059)上調(diào)(P＜0.05),COP1 mRNA表達(dá)水平(0.7974±0.0192)較對(duì)照組(1.3336±0.0903)下調(diào)(P＜0.05),caspase-3 mRNA表達(dá)水平(0.4376±0.0625)較對(duì)照組(0.1152±0.0485)上調(diào)(P＜0.05);轉(zhuǎn)染p53 siRNA后p53 mR

4、NA(0.5283±0.0099)和caspase-3 mRNA(0.1866±0.0981)表達(dá)較高糖組下調(diào)(P＜0.05),COP1mRNA表達(dá)(0.83±0.028)與高糖組則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而甘露醇組、p53 siRNA質(zhì)粒陰性對(duì)照組的p53、COP1、caspase-3 mRNA表達(dá)水平與高糖組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。⑶高糖刺激足細(xì)胞48h后其p53蛋白水平(0.6921±0.0944)較對(duì)照組

5、(0.2420±0.0392)上調(diào)(P＜0.05),COP1蛋白水平(0.135±0.03848)較對(duì)照組(0.3359±0.0865)下調(diào)(P＜0.05),caspase-3蛋白表達(dá)水平(0.576±0.1014)較對(duì)照組(0.226±0.0131)上調(diào)(P＜0.05);轉(zhuǎn)染p53siRNA后p53蛋白(0.1002±0.0349)和caspase-3蛋白表達(dá)水平(0.138±0.011)較高糖組均下調(diào)(P＜0.05),COP1蛋白(

6、0.142±0.03518)與高糖組則差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);而甘露醇組、p53 siRNA質(zhì)粒陰性對(duì)照組的p53、COP1、caspase-3蛋白表達(dá)水平與高糖組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 結(jié)論：①高糖可誘導(dǎo)小鼠腎小球足細(xì)胞凋亡;其機(jī)理可能是高糖促使足細(xì)胞p53 mRNA和蛋白的表達(dá)上調(diào)及抑制COP1介導(dǎo)的泛素化通路有關(guān)；②下調(diào)p53基因可抑制高糖誘導(dǎo)的腎小球足細(xì)胞的凋亡,但對(duì)COP1所介導(dǎo)的泛素化