高糖及脂多糖對大鼠腎小球系膜細(xì)胞NOD1-RICK-NF-kB信號通路的影響.pdf

1、目的:糖尿病腎病(diabetic nephropathy, DN)是糖尿病常見且特有的微血管并發(fā)癥之一，其危害巨大，然而目前具體的發(fā)病機(jī)制仍不清楚。國內(nèi)外大量研究表明，炎癥是糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的中心環(huán)節(jié)，核因子-κB(NF-κB)信號是介導(dǎo)糖尿病腎病(DN)炎癥的重要通路。最新研究表明，作為模式識別受體的NOD樣受體(NOD1)在NF-κB信號通路的調(diào)控激活中起著重要作用。細(xì)胞外刺激可經(jīng)過NOD1-RICK-IκB等信號分子激活NF-

2、κB信號通路，介導(dǎo)炎癥反應(yīng)。NOD1介導(dǎo)的NF-κB信號通路是否參與了糖尿病腎病的發(fā)病尚未見相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本研究采用大鼠腎小球系膜細(xì)胞(HBZY-1)進(jìn)行體外培養(yǎng)，高糖、脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）作為刺激因子，NOD1受體抑制劑(ML130)作為阻斷劑，分別采用western-blot和RT-PCR檢測NOD1、RICK、IκB、NF-κB等的蛋白及mRNA表達(dá)，旨在探討NOD1-RICK-NF-κB信

3、號在糖尿病腎病炎癥信號中的作用，為糖尿病腎病防治提供新的理論基礎(chǔ)。
　　方法:1.體外培養(yǎng)大鼠腎小球系膜細(xì)胞，分別給予葡萄糖、LPS以及NOD1的抑制劑(ML130)干預(yù)，分成以下7組:①正常對照組（NC組）:培養(yǎng)基含葡萄糖濃度為5.6mmol/L;②高糖組（HG1，HG2和HG3組）:培養(yǎng)基所含葡萄糖濃度分別為10mmol/L、20mmol/L和30mmol/L;③滲透壓對照組:培養(yǎng)基含葡萄糖5.6mmol/L和24.4mmol

4、/L的甘露醇;④LPS組(LPS1組，LPS2和LPS3組):培養(yǎng)基中LPS的濃度分別為1μg/L、5μg/L和10μg/L;⑤高糖+LPS組:培養(yǎng)基含30mmol/L葡萄糖和5μg/L LPS;⑥高糖+ML130組:含30mmol/L葡萄糖培養(yǎng)基中預(yù)先加入30μmol/L ML130(NOD1受體阻斷劑);⑦LPS+ ML130組:含5μg/L LPS的培養(yǎng)基中預(yù)先加入30μmol/LML130;2.分別將各組細(xì)胞培養(yǎng)一定時(shí)間后，采用

5、免疫印跡(Western-blotting)和RT-PCR技術(shù)檢測NOD1、RICK、IκB、NF-κB的蛋白及基因表達(dá);3.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析數(shù)據(jù)。所有的數(shù)據(jù)都用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)來表示，各組之間的數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，組內(nèi)兩兩比較采用LSD t檢驗(yàn)，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05，P＜0.05表明有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果:1.與NC組比較，不同濃度的高糖作用不同時(shí)間均可上調(diào)大鼠腎小球系膜細(xì)胞的NO

6、D1、RICK、NF-κB p65蛋白和mRNA的表達(dá)、下調(diào)IκBα表達(dá)（均P＜0.05），提示高糖呈時(shí)間和濃度依賴性刺激NOD1-RICK-NF-κB信號;2.與NC組比較，不同濃度的LPS作用不同時(shí)間可以上調(diào)系膜細(xì)胞NOD1、RICK、NF-κB蛋白及mRNA的表達(dá)，下調(diào)IκBα表達(dá)（均P＜0.05），提示LPS能激活NOD1-RICK-NF-κB的信號;3.與高糖組和LPS組相比，高糖+LPS組可增強(qiáng)NOD1、RICK、NF-κB

7、蛋白和mRNA表達(dá)，抑制IκBα表達(dá)，說明高糖和LPS能協(xié)同刺激NOD1-RICK-NF-κB信號。4.與高糖組和LPS組相比，預(yù)先加入ML130可阻斷高糖和LPS誘導(dǎo)的NOD1、RICK、NF-κB的高表達(dá)和IκBα的低表達(dá)（均P＜0.05），提示高糖和LPS是通過NOD1受體激活NF-κB信號通路。
　　結(jié)論:高糖及LPS通過NOD1受體激活系膜細(xì)胞RICK-NF-κB炎癥信號通路，NOD1介導(dǎo)的NF-κB信號通路可能參與了糖