COP1在高糖誘導(dǎo)小鼠腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用.pdf_第1頁
已閱讀1頁,還剩51頁未讀 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:探討COP1在高糖誘導(dǎo)的小鼠腎小球足細(xì)胞凋亡中的作用及其可能的保護(hù)機(jī)制。
   方法:將培養(yǎng)的足細(xì)胞分別以15、30、45mmol/L D-葡萄糖刺激12、24、48h,收集各組細(xì)胞和對照組細(xì)胞,流式細(xì)胞儀檢測足細(xì)胞凋亡率和死亡率,確定最佳劑量的葡萄糖刺激濃度和時(shí)間。再將新培養(yǎng)的足細(xì)胞分為對照組、高糖組(30mmol/L)和甘露醇組(30mmol/L),作用48h后,流式細(xì)胞儀、TLJNEL法檢測各組腎小球足細(xì)胞凋亡率。C

2、OP1基因真核表達(dá)質(zhì)粒pEGFP-COP1和空載體pEGFP-N1質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定后,采用脂質(zhì)體瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)染足細(xì)胞,熒光顯微鏡觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)染情況,流式細(xì)胞儀檢測真核表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率,半定量RT-PCR和Western blot方法分別檢測COP1 mRNA和蛋白表達(dá)。分別以30mmol/L葡萄糖刺激足細(xì)胞48h,細(xì)胞分為對照組、甘露醇組、高糖組、pEGFP-COP1轉(zhuǎn)染組、pEGFP-N1轉(zhuǎn)染組。流式細(xì)胞儀、TUNEL法檢測各組腎小球足

3、細(xì)胞凋亡率,RT-PCR和Western blot法分別檢測各組COP1 mRNA和蛋白水平的變化。
   結(jié)果:通過對小鼠腎小球足細(xì)胞凋亡指數(shù)和死亡指數(shù)在不同濃度葡萄糖隨時(shí)間變化比較,確定實(shí)驗(yàn)中誘導(dǎo)足細(xì)胞凋亡的最佳劑量的葡萄糖濃度為30mmol/L,刺激時(shí)間為48h。30mmol/L葡萄糖刺激小鼠足細(xì)胞48h后,足細(xì)胞凋亡指數(shù)明顯高于對照組(P<0.05),30mmol/L甘露醇作用48h后,足細(xì)胞凋亡指數(shù)與對照組相比差異無統(tǒng)

4、計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。經(jīng)酶切和測序鑒定,COP1真核表達(dá)質(zhì)粒構(gòu)建成功。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染足細(xì)胞,轉(zhuǎn)染pEGFP-COP1和pEGFP-N1的足細(xì)胞在熒光顯微鏡下可檢測到綠色熒光信號,流式細(xì)胞儀檢測質(zhì)粒轉(zhuǎn)染率在30%-40%。轉(zhuǎn)染pEGFP-COP1的足細(xì)胞經(jīng)RT-PCR、Western blot鑒定COP1基因在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平獲得高表達(dá)(P<0.05)。pEGFP-COP1轉(zhuǎn)染足細(xì)胞,與30mmol/L葡萄糖孵育48h后,細(xì)胞凋亡率較高糖組明

5、顯降低,差異有顯著性(P<0.05),與對照組和甘露醇組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);Pegfp-N1轉(zhuǎn)染組足細(xì)胞凋亡率與高糖組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),明顯高于對照組和甘露醇組,差異有顯著性(P<0.05)。pEGFP-COP1轉(zhuǎn)染組COP1 mRNA表達(dá)較高糖組明顯增加,差異有顯著性(P<0.05),與對照組和甘露醇組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);pEGFP-N1組COP1 mRNA表達(dá)與高糖組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論