Sp1在高糖誘導(dǎo)腎小球足細胞凋亡中的作用及機制研究.pdf

1、研究背景:
　　糖尿病腎病（Diabetic nephropathy，DN）是糖尿病病人常見的重要并發(fā)癥之一，發(fā)病率在我國呈逐漸上升趨勢，隨著病情的進展而成為終末期腎臟病，因此，研究者們盡量想了解糖尿病腎病中腎小球損傷的機制，希望發(fā)現(xiàn)新的治療策略。
　　足細胞是高度終末分化的腎小球臟層上皮細胞，覆蓋于腎小球基底膜(Glomerular basement membrane，GBM)外側(cè)，在腎小球功能的調(diào)節(jié)中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用

2、。目前研究一致認為足細胞在DN的發(fā)病機制中發(fā)揮重要的作用。足細胞損傷表型改變的主要特征為細胞凋亡，體外和體內(nèi)實驗均證實高糖(HG)誘導(dǎo)足細胞凋亡，從而引起其損傷和數(shù)量的減少。但其具體機制目前仍然不甚清楚，因此，有必要對DN中足細胞凋亡所致的機制進一步深入研究，為臨床預(yù)防和治療DN提供理論依據(jù)。
　　轉(zhuǎn)錄因子特異性蛋白-1(Sp1)屬于SP/KLF轉(zhuǎn)錄因子家族成員之一，之前的研究數(shù)據(jù)顯示:Sp1在人類包括甲狀腺、胰腺、肝細胞、結(jié)直腸

3、和胃癌各種腫瘤中高表達，這可能是腫瘤存在或發(fā)展的關(guān)鍵因素。最近，越來越多的證據(jù)表明Sp1與細胞凋亡有關(guān)，同時一些研究也證實Sp1還參與DN的發(fā)病機制。與此同時，有研究表明Sp1在維持足細胞完整性尤為重要，然而，HG是否激活Sp1在足細胞中的表達從而導(dǎo)致足細胞的凋亡還不清楚，本研究的目的是探討高葡萄糖是否激活體外培養(yǎng)足細胞Sp1的表達以及其在高糖誘導(dǎo)足細胞凋亡中的可能機制。
　　研究方法:
　　永生的小鼠足細胞在含有正常葡萄糖

4、(NG)、高糖(HG)或Sp1 siRNA培養(yǎng)基中培養(yǎng)，用實時PCR、免疫印跡和免疫熒光測定足細胞中Sp1的表達。在使用Sp1 siRNA下調(diào)Sp1表達的情況下，通過流式細胞分析儀檢測Sp1在高糖誘導(dǎo)足細胞凋亡中的作用。使用實時PCR、免疫印跡方法檢測細胞凋亡基因Bax的mRNA和蛋白質(zhì)的表達。統(tǒng)計分析采用SPSS17.0，數(shù)據(jù)用均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。多個組之間的比較使用單向方差分析與Bonferonni's/Turkey檢驗或Dunnet

5、t's T3檢驗。P＜0.05認為有統(tǒng)計學(xué)差異。
　　結(jié)果:
　　在培養(yǎng)的足細胞中，高糖以時間和劑量依賴的方式刺激Sp1的表達。用Sp1siRNA預(yù)處理后(50nm)明顯降低Sp1的表達;同時，高糖引起的細胞凋亡效應(yīng)也被明顯抑制。此外，我們還發(fā)現(xiàn)HG也增加了足細胞中Bax的表達，這一效應(yīng)同樣能被Sp1 siRNA所下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　Sp1/Bax信號通路在HG誘導(dǎo)足細胞凋亡中發(fā)揮作用，阻斷Sp1/Bax信號