攜帶OPG基因的慢病毒轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療骨質(zhì)疏松大鼠的效果研究.pdf

1、目的：
　　將攜帶有OPG基因的慢病毒體外轉(zhuǎn)染至大鼠BMSCs，并檢測(cè)其表達(dá)結(jié)果，為體內(nèi)基因治療骨質(zhì)疏松提供種子細(xì)胞。然后將轉(zhuǎn)染成功的BMSCs注射到骨質(zhì)疏松大鼠的骨髓腔內(nèi)，分不同時(shí)段測(cè)定相關(guān)指標(biāo)，觀察測(cè)定其治療效果，探索其治療骨質(zhì)疏松癥的可行性。
　　方法：
　　體外實(shí)驗(yàn)選取清潔級(jí)2月齡的雌性SD大鼠2只，無菌條件下取其股骨和脛骨,分離和培養(yǎng)BMSCs，第三代時(shí)進(jìn)行慢病毒轉(zhuǎn)染,設(shè)立對(duì)照組(未經(jīng)任何特殊處理)、未攜帶O

2、PG基因慢病毒載體組(轉(zhuǎn)染PGC-FU-RFP)、攜帶OPG基因慢病毒載體組(轉(zhuǎn)染 PGC-FU-OPG-RFP)。72h后,免疫熒光顯微鏡觀察其熒光表達(dá)，流式細(xì)胞儀測(cè)定表達(dá)效率。體內(nèi)試驗(yàn)選取健康6月齡雌性SD大鼠30只，隨機(jī)分成5組，每組各6只：A組：假手術(shù)組；B組：雙側(cè)卵巢切除組。造模三個(gè)月后測(cè)定大鼠的骨密度。造模成功后，給予各組左股骨髓腔注射：B1組生理鹽水；B2組BMSCs；B3組未轉(zhuǎn)染OPG基因的BMSCs；B4組轉(zhuǎn)染OPG基

3、因的BMSCs。分別于注射后第6、12周后測(cè)定大鼠的骨密度，血清鈣、磷濃度、血清骨堿性磷酸酶(B-ALP)及 I型膠原交聯(lián) C-末端肽(CTX-1)，X線攝片觀察股骨大體情況。12周后頸椎脫臼處死大鼠，進(jìn)行雙側(cè)股骨標(biāo)本大體觀察，右側(cè)股骨三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果：
　　體外實(shí)驗(yàn)成功培養(yǎng)出第三代大鼠的BMSCs,以MOI=100轉(zhuǎn)染，72h后熒光表達(dá)滿意，轉(zhuǎn)染效率達(dá)70—80％。體內(nèi)試驗(yàn)，造模前：骨密度測(cè)定，各

4、組間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。造模3月后：骨密度、血磷B組明顯低于A組；血鈣、B-ALP、CTX-1 B組明顯高于A組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。骨髓腔注射BMSCs或生理鹽水6周后：骨密度B組仍低于A組，B4組高于其余B組，B2、B3組均高于B1組；血鈣B4組低于其余B組，血磷B4組高于其余B組，明顯低于A組；B-ALP和CTX-1，B組仍明顯高于A組，B4組明顯低于其余B組，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。骨髓腔注射BMSCs或生理鹽水1

5、2周后，除血磷、B-ALP、CTX-1 B4組與A組無差異外，其余比較結(jié)果與6周后相同，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。骨髓腔注射BMSCs或生理鹽水12周后，B4組骨密度明顯高于6周后，B-ALP、CTX-1明顯低于6周后，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，血鈣、血磷的變化不明顯。不同時(shí)期各組大鼠的股骨X線片比較，變化不明顯。各組大鼠股骨標(biāo)本差異不明顯。股骨三點(diǎn)彎曲試驗(yàn)示：右側(cè)股骨最大載荷、最大撓度、最大能量吸收、最大應(yīng)力及彈性模量，B