骨髓間充質(zhì)干細胞治療大鼠腦缺血的實驗研究.pdf

1、本課題研究目的：研究BMSCs腦內(nèi)移植治療缺血性腦卒中的效果，探討：BMSCs治療缺血性腦卒中的可能機制及細胞體內(nèi)的追蹤技術(shù)，為干細胞治療缺血性腦卒中的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。 研究內(nèi)容和方法：擬建立大鼠大腦中動脈梗阻(middle cerebral atery occlusion，MCAO)腦缺血模型，采用腦立體定向BMSCs移植的方法進行動態(tài)研究。課題研究共分為三部分。第一部分：通過培養(yǎng)近交系Wistar大鼠的BMSCs，進行

2、細胞腦內(nèi)移植，利用進口電生理儀器監(jiān)測腦卒中大鼠細胞治療前后腦電生理的變化并進行統(tǒng)計學(xué)分析；第二部分：利用免疫熒光技術(shù)、ELISA技術(shù)、real-time定量RT-PCR技術(shù)以及動物行為學(xué)評價體系研究人骨髓問充質(zhì)干細胞(human bone marrowmesenchymal stem eells，hBMSCs)移植到腦卒中大鼠腦內(nèi)后細胞的存活時間、遷移、分化、腦內(nèi)神經(jīng)營養(yǎng)因子分泌水平的變化以及多角度行為學(xué)的變化規(guī)律等。第三部分：利用超順

3、磁性氧化鐵離子Feridex標記BMSCs，將Feridex標記的BMSCs移植到卒中腦內(nèi)后進行高場強磁共振的體內(nèi)活體追蹤，以研究細胞的存活、遷移及對腦梗死體積的影響；從電生理、形態(tài)學(xué)、功能學(xué)及影像學(xué)等方面探索BMSCs治療缺血性腦卒中的機制和依據(jù)。 研究結(jié)果： 1.腦內(nèi)移植BMSCs后治療組和對照組相比可以促進腦電快波的恢復(fù)，減少腦梗死后的慢波比例，并且相同監(jiān)測時間點的腦電圖平均波幅有顯著提高，細胞的移植促進了實驗大鼠

4、的神經(jīng)興奮性。 2.在細胞移植后的第1、2周細胞大量存活并向病灶遷移，第3周細胞存活數(shù)量明顯減少，第4周存活細胞極少；hBMSC在大鼠腦內(nèi)沒有明確表達MAP2、GFAP和GalC等神經(jīng)細胞的特異蛋白。 3.神經(jīng)營養(yǎng)因子的測定結(jié)果顯示，治療組和對照組四種神經(jīng)營養(yǎng)因子的表達水平在細胞移植后的不同時間點均有不同程度的顯著差異，但在第4周均沒有統(tǒng)計學(xué)的差異。 4.行為學(xué)方面BMSCs移植治療10天后治療組大鼠的運功功能、

5、感覺功能以及學(xué)習(xí)記憶能力均有不同程度的改善。 5.磁共振追蹤顯示移植后第14天BMSCs有向缺血灶邊緣遷移、彌散的趨勢，但是細胞移植不能影響大鼠腦梗死體積的變化。 結(jié)論： BMSCs腦內(nèi)移植可以顯著改善腦缺血大鼠神經(jīng)功能的恢復(fù)，提高大鼠腦電生理的神經(jīng)興奮性；移植細胞在大鼠腦內(nèi)可以向病灶周圍遷移，但是細胞存活有一定時限性；BMSC在大鼠腦內(nèi)沒有明確分化為神經(jīng)細胞，但是可以在細胞移植后的一段時間內(nèi)促進卒中腦內(nèi)的神經(jīng)營