應(yīng)用間充質(zhì)干細(xì)胞治療骨質(zhì)疏松的研究.pdf

1、目的：本研究以兔去勢(shì)后骨質(zhì)疏松為模型，研究去勢(shì)和老齡化對(duì)脂肪源間充質(zhì)干細(xì)胞（ASCs）成骨能力的影響，探討應(yīng)用ASCs治療骨質(zhì)疏松的可行性；研究局部高密度培養(yǎng)骨髓細(xì)胞的體內(nèi)外成骨能力，為骨質(zhì)疏松骨折后的組織工程治療提供可能的細(xì)胞來(lái)源。
　　方法：使用切除雙側(cè)卵巢（去勢(shì)手術(shù)）的方法建立兔去勢(shì)后骨質(zhì)疏松模型，使用X線攝片進(jìn)行模型效果評(píng)價(jià)。所有動(dòng)物在手術(shù)前及手術(shù)后6個(gè)月分別取脂肪，分離培養(yǎng)間充質(zhì)干細(xì)胞，檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，并經(jīng)成骨誘導(dǎo)4周

2、后，檢測(cè)堿性磷酸酶及鈣離子含量，比較各組間成骨能力的差異。
　　取大鼠骨髓分別以局部高密度和傳統(tǒng)密度進(jìn)行接種，兩組細(xì)胞成骨誘導(dǎo)4周后，行茜素紅染色，堿性磷酸酶及鈣離子定量，并用Q-PCR檢測(cè)骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）及轉(zhuǎn)錄因子（Runx2）的mRNA表達(dá)，比較體外成骨能力。用藻酸鈣凝膠混合兩組不同方法培養(yǎng)的細(xì)胞，注射于裸鼠皮下，12周后取材，對(duì)體內(nèi)成骨情況進(jìn)行初步研究。
　　結(jié)果：
　　1、ASCs增殖：去勢(shì)

3、組中，去勢(shì)前所取細(xì)胞的增殖速度快于去勢(shì)后6個(gè)月所取細(xì)胞，假手術(shù)組中，手術(shù)前所取細(xì)胞的增殖能力也要強(qiáng)于手術(shù)后6個(gè)月所取細(xì)胞，而去勢(shì)組與假手術(shù)組6個(gè)月后所取的細(xì)胞增殖能力相似。
　　2、ASCs成骨能力：去勢(shì)組中，去勢(shì)前與去勢(shì)后6個(gè)月所取細(xì)胞ALP與鈣離子含量比較，去勢(shì)前細(xì)胞較高，并有顯著差異（p<0.05），假手術(shù)組中，手術(shù)前所取細(xì)胞的ALP與鈣離子含量較手術(shù)后6個(gè)月所取細(xì)胞高（p<0.05），而去勢(shì)組6個(gè)月后和假手術(shù)組6個(gè)月后的細(xì)

4、胞ALP和鈣離子含量無(wú)顯著差異。
　　3、高密度培養(yǎng)骨髓細(xì)胞成骨能力：相同細(xì)胞總數(shù)的兩組細(xì)胞，經(jīng)成骨誘導(dǎo)，傳統(tǒng)密度培養(yǎng)的細(xì)胞鈣離子濃度高于局部高密度培養(yǎng)的細(xì)胞（p<0.05），茜素紅染色大體及鏡下得出同樣結(jié)論。
　　4、高密度培養(yǎng)骨髓細(xì)胞成骨基因表達(dá)：傳統(tǒng)密度培養(yǎng)的細(xì)胞骨鈣素（OCN）、骨橋蛋白（OPN）和轉(zhuǎn)錄因子（Runx2）的mRNA表達(dá)均高于局部高密度培養(yǎng)的細(xì)胞（p<0.05）。
　　5、高密度培養(yǎng)骨髓細(xì)胞，在體