重組9型腺相關(guān)病毒轉(zhuǎn)染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞.pdf

1、目的:觀察攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因的重組9型腺相關(guān)病毒(rAAV9-eGFP)對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。
　　方法:將攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白基因的重組9型腺相關(guān)病毒以不同感染復(fù)數(shù)(1×105，1×106，1×107)轉(zhuǎn)染體外培養(yǎng)的第4代小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，并在轉(zhuǎn)染后1-7 d連續(xù)用熒光倒置顯微鏡觀察骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中增強(qiáng)型綠色熒光蛋白陽(yáng)性表達(dá)情況，尋找最佳感染條件;采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)最佳感染復(fù)數(shù)下攜帶增強(qiáng)型綠色熒光蛋白

2、基因的重組9型腺相關(guān)病毒對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。
　　結(jié)果:轉(zhuǎn)染后第1天，感染復(fù)數(shù)為1×107組可見(jiàn)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白開(kāi)始表達(dá)，轉(zhuǎn)染后第2天，感染復(fù)數(shù)為1×105、1×106組開(kāi)始表達(dá);各組增強(qiáng)型綠色熒光蛋白表達(dá)強(qiáng)度隨感染復(fù)數(shù)值的增高而增強(qiáng)，同時(shí)增強(qiáng)型綠色熒光蛋白的表達(dá)強(qiáng)度隨著時(shí)間延長(zhǎng)而逐漸增強(qiáng);轉(zhuǎn)染后第5天達(dá)到高峰，此時(shí)感染復(fù)數(shù)為1×107組轉(zhuǎn)染效率約8％。
　　結(jié)論:重組腺相關(guān)病毒rAAV9-eGFP對(duì)小鼠BM