AnG-(1-7)抑制腫瘤增殖和遷移的機制及其在腫瘤基因治療的應用.pdf

1、目的:
　　Ang-(1-7)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)中的一種內源性多肽。研究表明，Ang-(1-7)具有抗腫瘤作用且對正常細胞無明顯影響，是理想的抗腫瘤藥物，但其機制尚不明確;而Ang-(1-7)多肽在體內快速降解則嚴重影響其作用的發(fā)揮。本研究旨在進一步研究Ang-(1-7)的抗腫瘤機制，探索利用重組腺相關病毒(AAV)載體介導體內穩(wěn)定高水平表達Ang-(1-7)治療腫瘤的可行性。
　　內容及結果:
　　1.

2、Ang-(1-7)體外抑制非小細胞肺癌細胞增殖機制
　　利用重組慢病毒載體LV-Ang-(1-7)感染肺癌細胞，結果顯示LV-Ang-(1-7)能夠介導Ang-(1-7)在細胞內高效表達，Ang-(1-7)過表達能夠顯著抑制非小細胞肺癌增殖，BrdU摻入試驗發(fā)現Ang-(1-7)可抑制細胞DNA復制。對其機制研究表明，Ang-(1-7)能夠顯著下調DNA復制起始蛋白Cdc6，并且顯著抑制DNA復制起始蛋白Mcm2、Mcm6、Mcm

3、7與染色質結合。說明Ang-(1-7)能夠抑制DNA復制前復合體(Pre-RC)組裝，從而抑制DNA復制。
　　2.Ang-(1-7)抑制腫瘤EMT轉化及其機制
　　首先，Transwell遷移實驗證實Ang-(1-7)能夠抑制肺癌細胞、鼻咽癌細胞的遷移。其次，Ang-(1-7)能夠升高肺癌、鼻咽癌細胞上皮標志物E-Cadherin蛋白表達，對間質標志物Vimentin的表達無明顯影響;在鼻咽癌細胞中，Ang-(1-7)能降

4、低Slug、Snail的mRNA和蛋白水平，這些結果說明Ang-(1-7)可抑制EMT轉化。進一步研究發(fā)現，Ang-(1-7)組中Smad2和Smad3的磷酸化水平顯著降低;此外，Ang-(1-7)還能抑制p38磷酸化。這些結果提示，Ang-(1-7)能夠通過Slug/Snail-Smad及p38通路抑制腫瘤EMT，從而抑制腫瘤細胞遷移。
　　3.AAV8介導Ang-(1-7)在裸鼠體內過表達對肺癌移植瘤生長的影響
　　建立

5、Spc-A1肺癌細胞裸鼠皮下移植瘤模型，將重組AAV8(Y733F)-Ang-(1-7)和AAV8(Y733F)-eGFP載體經尾靜脈注入裸鼠。結果顯示，AAV8(Y733F)-Ang-(1-7)組裸鼠肝臟中穩(wěn)定高表達Ang-(1-7)，且血液中Ang-(1-7)濃度持續(xù)升高;Ang-(1-7)過表達能顯著抑制裸鼠肺癌皮下移植瘤的生長。免疫組化結果進一步表明AAV8(Y733F)-Ang-(1-7)組的腫瘤組織中Ki67、Cdc6、VE

6、GF表達明顯下降，并且腫瘤血管密度明顯低于對照組。
　　4.在免疫功能完整的小鼠體內，AAV8(Y703F)突變載體介導Ang-(1-7)過表達對肝癌移植瘤生長的影響
　　本研究進一步驗證了Ang-(1-7)基因治療肝癌的有效性。利用肝靶向性更強的AAV8(Y703F)載體介導Ang-(1-7)在免疫健全的Balb/c小鼠體內持續(xù)高表達，結果表明Ang-(1-7)過表達能顯著抑制H22小鼠肝癌移植瘤生長，降低PIGF、VEG

7、F及其受體的表達。
　　結論:
　　Ang-(1-7)能夠通過抑制Cdc6表達、阻礙pre-RC組裝，從而抑制腫瘤細胞DNA復制;Ang-(1-7)通過降低Slug、Snail表達和抑制Smad和p38磷酸化抑制腫瘤細胞EMT，從而抑制細胞遷移;在體內，基于AAV8的Ang-(1-7)過表達載體，無論在免疫缺陷的裸鼠體內，還是在免疫功能健全的小鼠內，均能介導Ang-(1-7)持續(xù)穩(wěn)定高表達，抑制細胞增殖和血管生成從而發(fā)揮抗腫