人EPCs來源外泌體修復糖尿病大鼠皮膚缺損的作用及機制.pdf

1、分類號：密級：UDC：學號：416523113089南昌大學專業(yè)學位研究生學位論文人EPCs來源外泌體修復糖尿病大鼠皮膚來源外泌體修復糖尿病大鼠皮膚缺損的作用及機制缺損的作用及機制TherolemechanismofexosomesderivedfromhumanEPCsinhealingofcutaneouswoundsindiabeticrats陳春媛陳春媛培養(yǎng)單位（院、系）：南昌大學公共衛(wèi)生學院指導教師姓名、職稱：汪泱研究員專業(yè)學

2、位種類：臨床醫(yī)學專業(yè)領域名稱：臨床檢驗診斷醫(yī)學論文答辯日期：2016年5月答辯委員會主席：評閱人：2016年5月摘要II摘要研究背景和目的研究背景和目的：皮膚創(chuàng)面難愈是糖尿病最常見和致殘率高的慢性并發(fā)癥之一。血管新生是傷口愈合過程中的一個關(guān)鍵步驟，它可為損傷區(qū)帶來氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，以促進創(chuàng)面細胞增殖、再上皮化和膠原再生。然而，糖尿病患者的血管新生能力常常降低，以致傷口遷延不愈。內(nèi)皮祖細胞（endothelialprogenitcells，

3、EPCs）是成熟內(nèi)皮細胞的天然祖細胞，研究證實EPCs移植可促進糖尿病動物皮膚缺損處血管新生和傷口閉合。新近研究發(fā)現(xiàn)移植細胞主要通過旁分泌機制發(fā)揮其治療功能，而外泌體是其中一種重要的旁分泌因子，可獨立地作為一種生物活性成分應用于組織再生。目前較少有關(guān)于外泌體修復糖尿病難愈創(chuàng)面的研究報道。鑒于EPCs強大的促血管新生和皮膚損傷修復功能，我們推測EPCs分泌的外泌體（EPCsderivedexosomes，EPCExos）很可能具有促進皮膚

4、缺損處血管新生和創(chuàng)傷愈合的功能。為此，我們探究了EPCExos對糖尿病大鼠皮膚損傷的修復功能和作用機制，以期為糖尿病難愈創(chuàng)面的治療提供一條新策略。方法方法：1.人臍血來源人臍血來源EPCs的分離培養(yǎng)和鑒定的分離培養(yǎng)和鑒定1.1EPCs的分離培養(yǎng)：采用經(jīng)典的密度梯度離心法分離人臍血中的單個核細胞，并采用EGM2MV完全培養(yǎng)基選擇性培養(yǎng)出EPCs。1.2EPCs的鑒定：普通光學顯微鏡下觀察細胞形態(tài)；免疫熒光和流式細胞術(shù)鑒定EPCs表面標志；

5、體外檢測EPCs在Matrigel表面成血管的能力；通過熒光染色檢測EPCs攝取DiLacLDL和結(jié)合FITCUEA1的能力。2.EPCExos的收集與鑒定的收集與鑒定2.1EPCExos的收集：采用經(jīng)典的超速離心法結(jié)合超濾法從EPCs的條件培養(yǎng)基中提取其分泌的外泌體即EPCExos。2.2EPCExos的鑒定：透射電子顯微鏡下觀察EPCExos的形態(tài)；可調(diào)電阻脈沖感應技術(shù)（tunableresistivepulsesensing，TR