FoxM1在髓系白血病中作用及其機(jī)制.pdf

1、背景：髓系白血病包括急性髓系白血病（AML）和慢性髓細(xì)胞白血?。–ML，簡(jiǎn)稱(chēng)慢粒）。AML是最常見(jiàn)急性白血病，疾病發(fā)展迅速，自然病程數(shù)月。以蒽環(huán)類(lèi)和阿糖胞苷為主的聯(lián)合化療是非急性早幼粒細(xì)胞白血病的AML的主要治療方法，但治療療效并不理想。由于AML疾病性質(zhì)高度異質(zhì)，一些基于AML發(fā)生發(fā)展相關(guān)分子為靶點(diǎn)的藥物不能滿足臨床治療的需要。因此，深入研究AML發(fā)生發(fā)展的機(jī)制，發(fā)現(xiàn)新的潛在治療靶標(biāo)是重要科學(xué)問(wèn)題。慢性髓細(xì)胞白血病包含慢性期、加速期和

2、急變期。酪氨酸激酶抑制劑對(duì)慢性期療效好，對(duì)加速期和急變期療效差。高三尖杉酯堿（HHT）是我國(guó)從三尖杉屬植物中分離出的抗腫瘤生物堿，研究發(fā)現(xiàn)HHT通過(guò)不依賴(lài)于BCR/ABL的機(jī)制發(fā)揮作用，對(duì)于CML加速期和急變期，以及對(duì)酪氨酸激酶抑制劑耐藥的CML患者均有效。但HHT有較強(qiáng)的心臟、骨髓抑制、高血糖等毒副作用，臨床用藥受限，因此發(fā)現(xiàn)與HHT具有協(xié)同作用的增敏分子，降低HHT的臨床有效用藥劑量，是提高HHT藥物效應(yīng)的重要策略。叉頭框蛋白M1（

3、FoxM1）是在有絲分裂G1/S和G2/M期中起正向調(diào)控的轉(zhuǎn)錄因子，在一些實(shí)體瘤中FoxM1過(guò)度表達(dá)，通過(guò)誘發(fā)細(xì)胞異常增殖參與惡性轉(zhuǎn)化，而在大多數(shù)正常成熟組織細(xì)胞FoxM1不表達(dá)，因此被認(rèn)為是抗腫瘤的潛在靶標(biāo)，但 FoxM1在急性白血病中作用的研究報(bào)道少見(jiàn)。原癌基因B淋巴細(xì)胞瘤-2（BCL2）是最受關(guān)注的細(xì)胞凋亡抑制基因，F(xiàn)oxM1能否調(diào)控BCL2在AML中發(fā)揮作用值得關(guān)注。HHT屬于細(xì)胞周期特異性藥物，F(xiàn)oxM1主要通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期相

4、關(guān)分子轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)細(xì)胞增殖參與腫瘤發(fā)生，抑制FoxM1可提高實(shí)體瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物敏感性。FoxM1和HHT都可以調(diào)控細(xì)胞周期，靶向干預(yù)FoxM1表達(dá)是否可以協(xié)同增敏 HHT抗白血病效應(yīng)未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的：⑴探討FoxM1及其調(diào)控的BCL2在AML發(fā)生發(fā)展中作用。⑵探討抑制慢粒急變細(xì)胞K562的FoxM1對(duì)于增強(qiáng)HHT的藥物敏感性。
　　方法：①qRT-PCR和細(xì)胞免疫熒光方法檢測(cè)AML初診組（de novo）、治療達(dá)完全緩解組

5、（CR）和難治復(fù)發(fā)組（RR）各17例患者FoxM1 mRNA水平和蛋白表達(dá)；轉(zhuǎn)染FoxM1siRNA抑制白血病HL60和K562細(xì)胞FoxM1表達(dá)，觀察對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)、克隆形成和細(xì)胞凋亡的影響；qRT-PCR和Western Blot法檢測(cè)FoxM1對(duì)BCL2表達(dá)的影響，雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)FoxM1是否可以靶向作用于BCL2啟動(dòng)子區(qū)域進(jìn)而影響B(tài)CL2表達(dá)。②HHT以不同濃度（0μmol/L，0.015μmol/L，0.03μmol/L，

6、0.045μmol/L）和最低起效濃度不同時(shí)間點(diǎn)（0.015μmol/L，0h，24h，48h，72h）作用K562細(xì)胞，qRT-PCR和Western blot法檢測(cè)FoxM1 mRNA和蛋白表達(dá)；以0.015μmol/L HHT作用K562細(xì)胞后轉(zhuǎn)染FoxM1 siRNA，觀察沉默K562細(xì)胞FoxM1后HHT的藥物敏感性、細(xì)胞增殖和凋亡效應(yīng)以及FoxM1相關(guān)靶分子c-myc和Sp1表達(dá)狀況。
　　結(jié)果：⑴AMLdenovo組

7、患者骨髓標(biāo)本FoxM1表達(dá)較正常對(duì)照顯著升高，CR組FoxM1表達(dá)較初診組降低，RR組FoxM1表達(dá)較初診組進(jìn)一步升高。轉(zhuǎn)染FoxM1 siRNA沉默HL60和K562細(xì)胞FoxM1表達(dá)后，細(xì)胞生長(zhǎng)速率下降，細(xì)胞克隆形成能力降低，細(xì)胞凋亡率升高，BCL2表達(dá)降低，雙熒光素酶活性實(shí)驗(yàn)證實(shí)FoxM1可靶向作用BCL2啟動(dòng)子區(qū)域調(diào)控BCL2表達(dá)。⑵隨著HHT濃度增加和作用時(shí)間延長(zhǎng)FoxM1表達(dá)逐漸降低，說(shuō)明HHT抑制K562細(xì)胞FoxM1表達(dá)

8、；HHT處理K562細(xì)胞后轉(zhuǎn)染FoxM1 siRNA，細(xì)胞生長(zhǎng)和克隆形成顯著下降，細(xì)胞凋亡增加，因此抑制FoxM1可增加K562細(xì)胞對(duì)HHT的藥物敏感性；FoxM1 siRNA組c-myc和Sp1表達(dá)顯著降低，表明FoxM1可正性調(diào)控c-myc和Sp1表達(dá)。
　　結(jié)論：①證實(shí)FoxM1可通過(guò)靶向調(diào)控BCL2促進(jìn)AML發(fā)生發(fā)展，干預(yù)FoxM1表達(dá)可抑制細(xì)胞增殖并促進(jìn)細(xì)胞凋亡，提示FoxM1是治療AML的潛在靶標(biāo)。②HHT可以抑制白血