環(huán)境微生物耐酸元器件的構(gòu)建與性能評(píng)估.pdf

1、微生物修復(fù)技術(shù)在治理環(huán)境污染方面發(fā)揮著越來(lái)越關(guān)鍵的作用，并已成功應(yīng)用于多環(huán)芳烴類(lèi)污染物的修復(fù)和治理。由于環(huán)境污染的多樣性和復(fù)雜性，環(huán)境微生物的抗逆性強(qiáng)弱成為微生物修復(fù)技術(shù)在實(shí)際應(yīng)用中的瓶頸所在。本論文著重于微生物的耐酸性改造方面的研究，通過(guò)發(fā)掘 E. coli中的耐酸元件谷氨酸脫羧酶基因(gadBC)和Deinococcus radiodurans R1中的全局調(diào)控基因irrE，并進(jìn)行基因體外克隆、人工修飾，構(gòu)建重組耐酸質(zhì)粒 pME-G

2、ad和pME-GirrE，利用電擊轉(zhuǎn)化的方法分別將耐酸元器件導(dǎo)入了尼古丁降解菌株P(guān)seudomonas putida S16和聯(lián)苯降解菌株P(guān)seudomonas putida B6-2中，顯著提高了兩株環(huán)境微生物在低pH(pH5.5、pH4.5、pH4.0)下的生長(zhǎng)能力。
　　利用高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)菌株生長(zhǎng)體系中的底物降解，證明了在pH7.0的尼古丁培養(yǎng)基和苯甲酸鈉培養(yǎng)基中，含有pME-Gad和含有pME-GirrE的P

3、. putida S16菌株的生長(zhǎng)和降解能力與對(duì)照菌株相比并無(wú)顯著差異；而在相應(yīng)的酸性培養(yǎng)基(pH5.5)中，含有耐酸元件的P. putida S16能夠完全降解培養(yǎng)基中的底物尼古丁和苯甲酸鈉，對(duì)照菌株幾乎不能生長(zhǎng)，也不能降解底物。此外，含有耐酸元件的P. putida B6-2菌株在pH5.5的條件下，能夠在24 h內(nèi)完全降解底物苯甲酸鈉，而對(duì)照菌株不能降解底物。實(shí)驗(yàn)結(jié)果充分說(shuō)明了耐酸元件gadBC和irrE能夠提高P. putida