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文檔簡介
1、奶牛乳腺炎是奶牛最常見的疾病之一,嚴(yán)重制約著奶牛養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展,尋找有效藥物來治療或預(yù)防乳腺炎,成為現(xiàn)在研究熱點。黃芩苷(Baicalin)是從黃芩干燥根中提取的黃酮類化合物,抗炎作用顯著,但其作用機(jī)制尚不清楚。誘導(dǎo)型熱休克蛋白72(HSP72),是HSP家族里含量最多研究最廣泛的一種分子伴侶蛋白,具有抗炎抗凋亡作用。核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)在細(xì)胞炎性反應(yīng)和細(xì)胞凋亡調(diào)控中具有重要作用,但其在奶牛乳腺上皮細(xì)胞炎性損傷中的調(diào)節(jié)機(jī)制尚不清楚。T
2、NF-α和IL-1β是兩種重要的促炎細(xì)胞因子,常伴隨著炎癥反應(yīng)產(chǎn)生,并損傷組織和細(xì)胞。Bcl-2家族對細(xì)胞凋亡具有顯著調(diào)控作用,其中Bcl-2具有抑制凋亡的作用,而Bax則能夠通過拮抗Bcl-2促進(jìn)凋亡。Caspase-3是caspase家族中最終的凋亡執(zhí)行者。目前,有關(guān)黃芩苷在奶牛乳腺上皮細(xì)胞上的保護(hù)作用機(jī)制研究甚少,在LPS刺激條件下,其是否對細(xì)胞有保護(hù)作用也未見報道。本研究通過檢測黃芩苷對乳腺上皮細(xì)胞和對 LPS誘導(dǎo)的乳腺上皮細(xì)胞
3、 TNF-α、IL-1β、Bcl-2、Bax、caspase-3、HSP72、NF-κB和IκB表達(dá)的影響,探究黃芩苷的作用機(jī)制。
本試驗通過酶消化組織塊法和酶消化法于體外培養(yǎng)獲得細(xì)胞,免疫組化鑒定結(jié)果證實,兩種方法成功培養(yǎng)的均為乳腺上皮細(xì)胞。將培養(yǎng)獲得的乳腺上皮細(xì)胞隨機(jī)分為4個組,對照(control)組為空白組,LPS組為LPS刺激12 h組,Bai組為黃芩苷預(yù)保護(hù)12 h組,LPS+Bai組為黃芩苷預(yù)保護(hù)12 h后LPS
4、刺激12 h組,運用實時熒光定量,ELISA和western blot等方法分別檢測 TNF-α、IL-1β、Bcl-2/Bax、caspase-3、HSP72、NF-κB和IκB的基因及蛋白的表達(dá);CCK-8檢測法檢測各組細(xì)胞活力。
結(jié)果顯示,LPS組TNF-α、IL-1β、caspase-3、NF-κB和IκB的表達(dá)量與空白組相比極顯著升高(P<0.01),LPS+Bai組與 LPS組相比上述指標(biāo)表達(dá)量顯著降低(P<0.0
5、5);同樣與空白對照組相比,LPS組Bcl-2/Bax相對表達(dá)量和細(xì)胞活力極顯著降低(P<0.01), LPS+Bai組與LPS組相比上述指標(biāo)極顯著升高(P<0.01);同樣與空白對照組相比,LPS組和Bai組HSP72表達(dá)升高,差異顯著(P<0.05),LPS+Bai組差異極顯著(P<0.01)。
綜合上述,LPS刺激乳腺上皮細(xì)胞能夠引起細(xì)胞炎性反應(yīng)和細(xì)胞凋亡,而黃芩苷可以減弱LPS引起的損傷,并很可能是通過調(diào)控HSP72和
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