辛伐他汀對急性髓系白血病NB4細胞株DNA甲基轉移酶的影響.pdf

1、背景:
　　急性髓系白血病(acute myeloid leukemia，AML)是一種造血系統(tǒng)的惡性疾病，以骨髓中異常的原始細胞和幼稚細胞過度增殖，抑制正常的造血功能，并廣泛浸潤肝、脾等臟器為特征。臨床表現(xiàn)為由骨髓衰竭和白血病細胞浸潤所造成的貧血、出血、感染、浸潤等征象，平均生存期短，嚴重威脅著人類健康。隨著現(xiàn)代醫(yī)學科學的迅速發(fā)展，AML的診治有了長足進步，許多患者獲得病情緩解，但根據(jù)美國SEER癌癥統(tǒng)計數(shù)據(jù)回顧的資料顯示，其無

2、病生存期及總體生存并無明顯改善。
　　表觀遺傳學是不涉及DNA堿基序列的改變，而基因功能卻發(fā)生了可逆改變，并可在發(fā)育和細胞增殖過程中穩(wěn)定傳遞的遺傳分支學科。DNA甲基化異常與許多惡性疾病密切相關，是急性白血病中最常見的表觀遺傳改變。基因組DNA的甲基化修飾由DNA甲基轉移酶(DNA methyltransferase，DNMT)催化完成，它們參與胚胎發(fā)育、基因表達調控等諸多生物學過程。國外研究發(fā)現(xiàn)，DNA甲基轉移酶基因在白血病患者

3、和白血病細胞株中均有異常表達，且與某些抑癌基因失活密切相關。白血病常規(guī)化療藥物存在耐藥、復發(fā)等問題，而去甲基化藥物因其作用機制的不同，為治療提供了新的思路，對耐藥和復發(fā)的患者有一定療效。地西他濱、5-氮雜胞苷等已投入臨床使用的去甲基化藥物大多為DNMT酶活性抑制劑。
　　他汀類藥物為甲羥戊酸還原酶抑制劑，最初作為調節(jié)脂代謝藥物被用于臨床，近年研究發(fā)現(xiàn)，它還有抗炎、免疫抑制、抗血小板聚集、抑制腎臟細胞增殖及抗腫瘤等作用，且應用標準劑

4、量的他汀類藥物具有良好的耐受性、安全性。目前針對他汀類藥物去甲基化作用的研究較少。相關研究表明，洛伐他汀在結腸癌中可抑制DNMT的酶活性，使BMP2啟動子發(fā)生去甲基化，可在CpG島甲基化表型的大腸癌中被用作促分化試劑聯(lián)合或輔助治療。本實驗通過研究辛伐他汀(Simvastatin，SIM)在急性早幼粒細胞白血病NB4細胞株中對DNA甲基轉移酶的影響及其可能的作用機制，探討臨床白血病治療的新藥物。
　　目的:
　　在急性髓系白血

5、病NB4細胞株中，研究辛伐他汀對DNA甲基轉移酶的影響，并初步探討其作用機制，為急性髓系白血病的治療提供新的方法及思路。
　　方法:
　　1.將NB4細胞與不同濃度的辛伐他汀共培養(yǎng)，使其終濃度分別為0μmol/L、5μmol/L、10μmol/L和15μmol/L。
　　2.采用DNA甲基轉移酶活性/抑制檢測試劑盒測定辛伐他汀處理后的DNMT活性變化，觀察辛伐他汀對DNA甲基轉移酶活性的影響。
　　3.采用qRT

6、-PCR法檢測辛伐他汀處理后，DNMT1、DNMT3A、P53 mRNA表達水平的變化，觀察辛伐他汀對DNA甲基轉移酶基因及抑癌基因表達的影響。
　　4.采用Western-blotting法檢測辛伐他汀處理后，DNMT1、DNMT3A、DNMT3B蛋白水平的表達變化，觀察辛伐他汀對DNA甲基轉移酶蛋白表達的影響。
　　5.采用AnnexinⅤ/PI雙染法檢測辛伐他汀處理后，細胞凋亡率的變化。
　　結果:
　　1

7、.辛伐他汀處理后，可見DNMT總體酶活性下調(P＜0.05)，且呈一定的劑量依賴性。
　　2.辛伐他汀處理后，DNMT1、DNMT3A mRNA表達水平顯著降低，P53 mRNA表達水平增高（P＜0.05）。
　　3.辛伐他汀處理后，DNMT1、DNMT3A蛋白表達水平降低(P＜0.05)，DNMT3B蛋白表達未見明顯變化（P＞0.05）。
　　4.辛伐他汀促進NB4細胞凋亡，且呈一定的時間、劑量依賴性。
　　結