siRNA干擾EMS1基因?qū)GC803細(xì)胞黏附的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：本課題組前期利用基因芯片首次發(fā)現(xiàn)EMS1基因在胃癌中高表達(dá)，并已證實(shí)EMS1是胃癌細(xì)胞增殖、侵襲和遷移的關(guān)鍵分子。本實(shí)驗(yàn)?zāi)康脑谟跈z測siRNA抑制EMS1表達(dá)對MGC803細(xì)胞黏附能力的影響，并探討其具體分子機(jī)制。
　　方法：
　　1.通過MGC803細(xì)胞-HUVEC黏附實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞基質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)檢測抑制EMS1表達(dá)后MGC803細(xì)胞的黏附能力。
　　2.采用4×44K人全基因組寡核苷酸微陣列芯片技術(shù)比較分析正常 M

2、GC803細(xì)胞與干擾EMS1表達(dá)后MGC803細(xì)胞基因表達(dá)的差異，篩選出fold change>=2的基因?yàn)楸磉_(dá)上調(diào)基因和fold change<=0.5為表達(dá)下調(diào)基因。
　　3.運(yùn)用實(shí)時(shí)定量PCR和Western Blotting驗(yàn)證基因芯片結(jié)果。
　　4.利用基因分析軟件對篩選出的差異表達(dá)基因進(jìn)行功能分析。
　　結(jié)果：
　　1. MGC803細(xì)胞-HUVEC黏附實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示MGC-803-EMS1細(xì)胞組與HU

3、VEC的黏附能力明顯比MGC803細(xì)胞和MGC-803-NEU細(xì)胞組低（P<0.05）。
　　2. MGC803細(xì)胞基質(zhì)黏附實(shí)驗(yàn)表明MGC-803-EMS1細(xì)胞組黏附能力比MGC803細(xì)胞和MGC-803-NEU細(xì)胞組低（P<0.05）。
　　3.基因芯片根據(jù)fold change>=2.0或<=0.5篩選出3434個(gè)差異表達(dá)基因，其中3052個(gè)屬于Homo sapiens，包括842個(gè)上調(diào)基因和2210個(gè)下調(diào)基因。

4、　　4.實(shí)時(shí)定量 PCR檢測結(jié)果顯示：經(jīng)內(nèi)參校正后，與正常 MGC803細(xì)胞相比，VEGFC和ILK在MGC-803-EMS1組表達(dá)下調(diào)。
　　5. Western Blotting結(jié)果表明：ILK在MGC-803-EMS1組表達(dá)明顯降低，而 PAK1在兩組細(xì)胞中表達(dá)沒有差異。
　　6.差異表達(dá)基因的生物信息學(xué)分析
　　利用DAVID、PATHWAY及GO分類等生物信息學(xué)軟件綜合對差異表達(dá)基因進(jìn)行生物學(xué)功能分析及預(yù)測，

5、上調(diào)基因 FZR1, CDC2L1, PMF1主要參與“cell cycle”,“mitosis”等生物學(xué)過程，下調(diào)基因 ITGAE, ITGAV, ILK, CEACAM1, ADAM33, ADAMTS10, ITGA6, DOCK1, MYH9, DST, ITGA2等基因與integrin-mediated signaling pathway”等腫瘤相關(guān)信號通路密切相關(guān)，其中CTNNB1, COL13A1, ADAM8, ICA

6、M2, NPHP1與cell-cell adhesion過程有關(guān)。TGAV, ECM2, COL13A1, ILK, ITGA6, EPDR1, COL17A1, NID2, ITGA2, FBLN5與cell-matrix adhesion有關(guān)。SKP2, VEGFC, RAF1, FGF2, CSF1R, CYR61, BUB3, NASP, ILK等參與cell proliferation過程。
　　結(jié)論：
　　EMS