亞硝酸鈉對高肺血流肺動脈高壓大鼠的影響及機(jī)制研究.pdf

1、目的：先天性心臟病肺動脈高壓是由肺血管重構(gòu)導(dǎo)致的病理綜合征，特征為肺動脈壓力和肺血管阻力進(jìn)行性升高，最終導(dǎo)致右心功能衰竭甚至死亡。本實(shí)驗(yàn)通過腹主動脈-下腔靜脈分流手術(shù)建立高肺血流肺動脈高壓大鼠模型，模擬先天性心臟病肺動脈高壓，探討亞硝酸鈉對高肺血流肺動脈高壓大鼠的影響及亞硝酸鹽轉(zhuǎn)化為NO的可能機(jī)制，為臨床治療先天性心臟病肺動脈高壓提供新思路。
　　方法：健康清潔級雄性SD大鼠70只，體質(zhì)量200~230g，按照隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為

2、7組：假手術(shù)組(S組)、肺動脈高壓組(P組)、亞硝酸鈉3mg/kg（N1組）、亞硝酸鈉6mg/kg（N2組）、亞硝酸鈉3mg/kg+XOR抑制劑組（N1X組）、亞硝酸鈉6mg/kg+XOR抑制劑組（N2X組）、XOR抑制劑組（X組），每組10只。S組僅開腹暴露腹主動脈和下腔靜脈，其余各組通過進(jìn)行腹主動脈-下腔靜脈分流手術(shù)，建立高肺血流肺動脈高壓大鼠模型。術(shù)后11周分別給予N1組和N1X組大鼠亞硝酸鈉3mg/kg，N2組和N2X組大鼠亞硝

3、酸鈉6mg/kg，X組大鼠黃嘌呤氧化還原酶（XOR）抑制劑別嘌呤醇30mg/kg灌胃干預(yù)，N1X組、N2X組在亞硝酸鈉給藥前1h給予XOR抑制劑別嘌呤醇30mg/kg，余兩組給予等容量的生理鹽水，1次/d，共3周。14周時監(jiān)測平均肺動脈壓(mPAP)和平均動脈壓(MAP)；計算右心室肥厚指數(shù)（RVHI）=右心室質(zhì)量/(左心室質(zhì)量+室間隔質(zhì)量)[RV/(LV+IS)]；硝酸還原酶法檢測血清及肺組織中NO含量；HE染色光鏡下觀察肺動脈的病理

4、學(xué)結(jié)果；Westem blot檢測肺組織XOR、eNOS蛋白含量變化。
　　結(jié)果：
　　1、與S組比較，P組mPAP顯著增高(P＜0.05)，表明肺動脈高壓模型建模成功；與P組比較，N1組mPAP差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)， N2組、單用抑制劑組mPAP降低(P＜0.05)；不同亞硝酸鈉劑量組比較，N2組比N1組mPAP降低顯著(P＜0.05)；加入黃嘌呤氧化還原酶抑制劑后，與未添加組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.0

5、5)。7組MAP比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　2、與S組比較，P組RV/（LV+IS）顯著升高(P＜0.05)；與P組比較， N1組RV/（LV+IS）差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而N2組和單用抑制劑組RV/（LV+IS）顯著降低(P＜0.05)；不同亞硝酸鈉劑量組比較，N2組比N1組RV/（LV+IS）降低明顯(P＜0.05)；加入黃嘌呤氧化還原酶抑制劑后，與未添加組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　3、與

6、S組比較，P組血清NO含量降低(P＜0.05)，肺勻漿NO含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與P組比較，N2組大鼠血清NO含量增加（P＜0.05），N1組血清NO含量及肺勻漿NO含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)；不同亞硝酸鈉劑量組比較，N2組比N1組血清NO含量增加（P＜0.05），肺勻漿NO含量差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；加入黃嘌呤氧化還原酶抑制劑后，與未添加組比較，添加抑制劑組血清和肺勻漿NO含量降低（P＜0.05）；

7、單用抑制劑組，血清和肺勻漿NO含量降低（P＜0.05）。
　　4、HE染色后通過光鏡觀察可見S組肺動脈管壁較薄，內(nèi)皮細(xì)胞扁平，內(nèi)膜光滑；分流手術(shù)后，肺動脈高壓組大鼠肺動脈管腔狹窄，其內(nèi)膜與中膜增厚，平滑肌細(xì)胞增殖，排列紊亂，同時伴有炎性細(xì)胞浸潤；而亞硝酸鈉治療后炎性細(xì)胞減少，肺動脈管壁增厚和管腔狹窄程度均得到明顯減輕；加入黃嘌呤氧化還原酶抑制劑后，肺血管重塑得到改善。
　　5、Western blot結(jié)果顯示，與S組比較，P

8、組eNOS蛋白表達(dá)降低(P＜0.05)，單用抑制劑組eNOS和XOR表達(dá)降低(P＜0.05)；與P組比較，N2組eNOS和XOR蛋白表達(dá)增加(P＜0.05)，N1組eNOS和XOR蛋白表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）；與未添加組比較，添加組XOR表達(dá)降低(P＜0.05)。
　　結(jié)論：亞硝酸鈉（6mg/kg）灌胃能降低高肺血流肺動脈高壓大鼠平均肺動脈壓力，減輕肺血管重塑；亞硝酸鈉降低肺動脈壓力的作用不完全被黃嘌呤氧化還原酶抑制劑