八種達瑪烷型人參皂甙免疫佐劑作用的研究.pdf

1、本文研究了八種不同結構達瑪烷型人參皂甙(Ginsenosides)Rg3、Rd、Rc、Rb1、Rb2、Rg1、Re和Rg2的免疫佐劑作用,初步探討不同類型、不同化學結構人參皂甙與其佐劑活性強弱之間的關系。對試驗使用的人參皂甙的溶血性進行了檢測以考察其用于局部注射的安全性。進一步探討八種人參皂甙單體中佐劑作用較強的Rg1與氫氧化鋁(Aluminum hydroxide,Alum)聯(lián)合應用的佐劑效果。本文還在細胞水平探討人參皂甙的佐劑作用機

2、理。
　　 1、達瑪烷型人參皂甙的溶血作用
　　 體外溶血試驗結果表明,Rb1在濃度為1 mg/ml時未出現(xiàn)溶血性現(xiàn)象。Rg1有微弱的溶血現(xiàn)象出現(xiàn),在1 mg/ml的濃度時,溶血百分比為5.28％,而QA溶血性相對較大,在8μg/ml的濃度時即已達到100％溶血。提示,本研究中使用的人參皂甙作為佐劑局部注射比較安全。
　　 2、八種不同結構達瑪烷型人參皂甙佐劑作用的研究
　　 以卵清白蛋白(Ovalbum

3、in,OVA)為模式抗原,研究了二醇組人參皂甙(Protopanaxadiol-type)Rg3、Rd、Rc、Rb1和Rb2,以及三醇組(Protopanaxatriol-type)Rg1、Re和Rg2的佐劑活性。55只BALB/c被隨機分成11組,在第1,21天分別腹部皮下注射生理鹽水、卵清白蛋白(OVA)、OVA+Rg3、OVA+Rd、OVA+Rb1、OVA+Rc、OVA+Rb2、OVA+Rg1、OVA+Re、OVA+Rg2或OVA

4、+OA。每只小鼠OVA的注射量為10μg,各種皂甙的注射量均為50μg。二免后2周,采血分離血清用于檢測OVA特異性IgG總抗體及抗體亞類IgG1和IgG2a水平。同時分離脾臟用于淋巴細胞增殖試驗和細胞因子的檢測。結果顯示,Rg1、Re、Rg2、Rg3和Rb1可顯著增強OVA特異性抗體的產(chǎn)生(P＜0.05)。而Rd、Re和Rb2未達到顯著水平(P＞0.05)。Rg1顯著增強了脾淋巴細胞體外受絲裂原刀豆蛋白A(ConcanavalinA,

5、Con A)、脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)和抗原OVA刺激的增殖反應(P＜0.05),以及受OVA刺激產(chǎn)生Interleukin-5(IL-5)和Interferon-γ(IFN-γ)的水平(P＜0.05),推測Rg1、Re、Rg2、Rg3和Rb1可能是人參皂甙中主要的佐劑活性成分。三醇組人參皂甙佐劑作用較強,二醇組人參皂甙佐劑作用微弱或幾乎無佐劑作用,但Rg3除外。進一步分析和比較8種人參皂甙的佐劑活性和結構

6、的關系發(fā)現(xiàn),各種人參皂甙佐劑活性的差異可能與結合在達瑪烷型骨架上的糖側鏈所決定的分子構象的不同有關。
　　 3、Rg1與氫氧化鋁聯(lián)合佐劑效果研究
　　 研究了Rg1及Rg1+Alum對OVA誘導的Th1和Th2類免疫應答的作用。結果顯示,Rg1對OVA特異性IgG(P＜0.05或P＜0.01)、IgGl(P＜0.05或P＜0.01)和IgG2a(P＜0.01或P＜0.001)抗體水平,IFN-γ,和IL-4水平(P＜0.

7、05)及慢性遲發(fā)型變態(tài)反應(Delayed-type hypersensitivity,DTH)(P＜0.01)均具有顯著的提高作用。Pg1(50μg)+Alum(200μg)與Alum(200μg)相比,顯著增強了OVA特異性IgG抗體、DTH反應和細胞因子IFN-γ和IL-5的水平(P＜0.05或P＜0.01),尤其是Th1類反應,包括IgG2a抗體水平(P＜0.01)、腳掌腫脹系數(shù)(P＜0.05)和IFN-γ水平(P＜0.01)。

8、結果提示Rg1單獨或Rg1+Alum可以用作佐劑來對于Th1/Th2類免疫應答均有顯著促進作用。
　　 4、Rg1佐劑作用機理的探討
　　 實時定量PCR(Real-time PCR,RT-PCR)分析體外Rg1對小鼠巨噬細胞(Macrophages,Mcp)的Toll樣受體(Toll-like receptor,TLR4)和誘導型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)