自噬在巨噬細(xì)胞清除凋亡細(xì)胞中的作用.pdf

1、目的:研究巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞后自噬結(jié)構(gòu)的形態(tài)學(xué)特征,探討自噬對于巨噬細(xì)胞清除凋亡細(xì)胞的作用,以及自噬與異噬的相互關(guān)系。
　　 方法:用環(huán)磷酰胺分別誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞凋亡。將凋亡的淋巴細(xì)胞和Jurkat細(xì)胞加入巨噬細(xì)胞培養(yǎng)皿,計(jì)算凋亡細(xì)胞清除率。通過Giesma染色和掃描電鏡觀察巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞的表面結(jié)構(gòu)變化,透射電鏡下觀察巨噬細(xì)胞吞噬凋亡細(xì)胞后自噬前體、自噬體、自噬溶酶體和兩性體的分布和結(jié)構(gòu)特點(diǎn),用圖像分析儀測

2、量自噬結(jié)構(gòu)與細(xì)胞質(zhì)的斷面面積,求出面積之比。用MDC染色法標(biāo)記巨噬細(xì)胞的自噬體,在激光共聚焦掃描顯微鏡下觀察和計(jì)數(shù)。用3-MA抑制巨噬細(xì)胞的自噬,觀察凋亡細(xì)胞被清除變化。
　　 結(jié)果:巨噬細(xì)胞活躍地吞噬凋亡細(xì)胞、凋亡細(xì)胞核、凋亡小體或其他細(xì)胞碎片,形成異噬體。與對照組比較,吞噬凋亡細(xì)胞組的巨噬細(xì)胞發(fā)生自噬的細(xì)胞增多,巨噬細(xì)胞內(nèi)自噬體數(shù)目增多,自噬前體、自噬體和自噬溶酶體與細(xì)胞質(zhì)的斷面面積之比增大。許多自噬體內(nèi)可見凋亡小體或其他細(xì)

3、胞碎片,這些自噬體的體積較大,多位于細(xì)胞膜下。亦可見內(nèi)含細(xì)胞質(zhì)樣物質(zhì)、損傷線粒體或內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等的自噬體,多位于線粒體和粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)附近。未觀察到含有整個(gè)凋亡細(xì)胞或凋亡細(xì)胞核的自噬體。在部分細(xì)胞出現(xiàn)吞噬體和自噬體融合而成的兩性體。兩性體內(nèi)含凋亡細(xì)胞碎片和完整自噬體內(nèi)膜結(jié)構(gòu)。當(dāng)巨噬細(xì)胞自噬受抑制時(shí),凋亡細(xì)胞清除率降低。
　　 結(jié)論:巨噬細(xì)胞清除凋亡細(xì)胞時(shí)自噬功能顯著增強(qiáng)。自噬對于凋亡細(xì)胞的清除起著重要的直接和間接作用。在凋亡細(xì)胞清除時(shí),自