羊肉成熟過程中細(xì)胞自噬對細(xì)胞凋亡的影響機(jī)制.pdf

1、肉在人類飲食結(jié)構(gòu)中是不可缺少的食品，也是人類獲取動物性蛋白質(zhì)的重要來源。我國具有數(shù)目眾多的奶山羊，其中關(guān)中奶山羊是我國奶山羊當(dāng)中的著名品種之一，且奶山羊在失去奶用價(jià)值后，重復(fù)利用其肉用價(jià)值是目前奶山羊企業(yè)非常關(guān)心的問題。嫩度是決定羊肉品質(zhì)最重要的因素之一，而淘汰奶山羊大多是成年山羊，其肉嫩度品質(zhì)的提高更是肉品企業(yè)面臨的關(guān)鍵技術(shù)問題。本試驗(yàn)以本地特色的關(guān)中奶山羊?yàn)檠芯繉ο螅钊胩接懝趋兰〖?xì)胞中細(xì)胞自噬對細(xì)胞凋亡的影響機(jī)制以及對羊肉的嫩化機(jī)

2、制。具體試驗(yàn)內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.檢驗(yàn)?zāi)躺窖蛉獬墒爝^程中伴隨著細(xì)胞自噬的發(fā)生。本研究取正常奶山羊背長條肌(LD)肉樣放置在4℃下，分別取其0、1、3、5天的肉樣提取胞漿蛋白進(jìn)行研究，對細(xì)胞自噬主要指標(biāo)Becline-1和LC3蛋白的表達(dá)進(jìn)行Western blot檢測。結(jié)果顯示，第1、3、5天樣品中Becline-1和LC3蛋白的表達(dá)量均顯著高于第0天，證明了羊肉成熟過程中伴隨著細(xì)胞自噬的發(fā)生。
　　2.驗(yàn)證雷帕霉素(R

3、PA)及3-甲基腺嘌呤(3-MA)處理對細(xì)胞自噬的作用。本研究以生理鹽水孵育處理作為對照，以細(xì)胞自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素及其抑制劑3-甲基腺嘌呤孵育處理奶山羊背長條肌肉樣，并經(jīng)由Western blot檢測Beclin-1及LC3蛋白的表達(dá)量。結(jié)果顯示，雷帕霉素處理組中Becline-1和LC3的蛋白表達(dá)量均顯著高于對照組，而3-甲基腺嘌呤處理組結(jié)果則相反，證明了雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤孵育處理可以調(diào)節(jié)奶山羊骨骼肌細(xì)胞的細(xì)胞自噬。
　　

4、3.驗(yàn)證細(xì)胞自噬對細(xì)胞凋亡的影響。本研究用雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理奶山羊背長條肌肉樣，以生理鹽水孵育處理作為對照，經(jīng)Western blot檢測細(xì)胞凋亡標(biāo)志蛋白Caspase-3與Cleaved Caspase-3蛋白的表達(dá)量。結(jié)果顯示，雷帕霉素處理組中Caspase-3及Cleaved Caspase-3的蛋白表達(dá)量均顯著高于對照組，而3-甲基腺嘌呤處理組結(jié)果則相反，證明了雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤孵育處理可以通過調(diào)節(jié)奶山羊骨骼肌細(xì)

5、胞的細(xì)胞自噬進(jìn)而調(diào)控其細(xì)胞凋亡。
　　4.檢驗(yàn)雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理對奶山羊肌肉嫩度的影響。本研究經(jīng)雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理奶山羊肉樣，以生理鹽水孵育處理作為對照，通過Western blot檢測肌間線蛋白表達(dá)量。結(jié)果顯示，經(jīng)雷帕霉素處理后，奶山羊骨骼肌細(xì)胞的肌間線蛋白的降解程度高于對照組，而經(jīng)3-甲基腺嘌呤處理則得到相反結(jié)果。說明可以通過奶山羊骨骼肌細(xì)胞的細(xì)胞自噬來調(diào)節(jié)其肉的嫩度。
　　5.檢驗(yàn)雷帕霉素及3-甲基

6、腺嘌呤處理對奶山羊骨骼肌細(xì)胞凋亡的兩條通路的影響。本試驗(yàn)經(jīng)雷帕霉素及3-甲基腺嘌呤處理奶山羊背長條肌肉樣，以生理鹽水孵育處理作為對照，通過Western blot檢測死亡受體通路當(dāng)中Fas、Fas-L、Caspase-8蛋白的表達(dá)與線粒體通路當(dāng)中Caspase-9、Bcl-2、Bax及胞漿內(nèi)細(xì)胞色素C蛋白的表達(dá)。結(jié)果表明，雷帕霉素處理組的Fas、Fas-L、Bax/Bcl-2及細(xì)胞色素C蛋白的表達(dá)量明顯高于對照組，Caspase-8和C