改變11β-HSD2表達(dá)水平對細(xì)胞炎性損傷的影響.pdf

1、背景:ARDS（Acuterespiratorydistresssyndrome，急性呼吸窘迫綜合征，）的抗炎治療中，GC（glucocorticoid，糖皮質(zhì)激素）是重要的抗炎藥物，但在臨床治療過程中，部分患者表現(xiàn)出GC治療不敏感甚至無效。局部器官或組織中的有活性的GC濃度才是抗炎效應(yīng)是否有效的一個(gè)重要指標(biāo)。細(xì)胞內(nèi)有活性的GC的濃度主要由11β-HSD（11-βhydroxysteroiddehydrogenase，11-β羥基類固醇

2、脫氫酶）來控制。11β-HSD2是GC的代謝酶，催化GCC11位的酮基與羥基之間的氧化還原反應(yīng)，在細(xì)胞內(nèi)將有生物活性的GC轉(zhuǎn)化為無活性的GC，從而降低局部器官組織細(xì)胞內(nèi)有生物活性的GC水平。內(nèi)皮細(xì)胞作為LPS(lipopolysaccharide，脂多糖)作用的靶細(xì)胞，在LPS引起的膿毒癥、膿毒性休克、多器官功能衰竭等病理過程中起著關(guān)鍵的作用，目前認(rèn)為血管內(nèi)皮功能障礙及凋亡不僅是心腦血管疾病發(fā)生的共同環(huán)節(jié)，而且是敗血癥、創(chuàng)傷、休克等應(yīng)激

3、情況下發(fā)生ARDS的重要原因。在ARDS發(fā)生過程中，失控性瀑布性炎癥反應(yīng)及高度肺水腫是機(jī)體發(fā)生的重要反應(yīng)。血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與激活是其中機(jī)體應(yīng)激的根本環(huán)節(jié)，所以血管內(nèi)皮細(xì)胞既是靶細(xì)胞也是效應(yīng)細(xì)胞。血管內(nèi)皮細(xì)胞被損傷或激活能夠迅速合成并分泌多種活性因子，其中IL-6（Interleukin-6，白介素-6）是血管內(nèi)皮炎癥反應(yīng)的最佳標(biāo)志分子，IL-6不但在血管內(nèi)皮細(xì)胞作為調(diào)節(jié)血管通透性的屏障中扮演重要角色，而且在機(jī)體免疫防御及炎癥反應(yīng)中同樣起

4、著重要的作用。GC是臨床應(yīng)用最廣泛的抗炎藥物，主要抑制機(jī)體的過度免疫防御反應(yīng)，由上述反應(yīng)可以看出GC對ARDS的抗炎作用必然會(huì)以血管內(nèi)皮細(xì)胞作為一個(gè)主要靶點(diǎn)，但長期以來有關(guān)GC治療ARDS的必要性常存在爭議，研究通常以臨床觀察為主，對于GC的抗炎作用機(jī)制則主要在受體水平進(jìn)行。有關(guān)GC治療ARDS時(shí)受體上游調(diào)節(jié)機(jī)制的研究目前未見報(bào)道。
　　 目的:用LPS刺激細(xì)胞，建立細(xì)胞損傷模型，探討調(diào)節(jié)11β-HSD2的水平在細(xì)胞損傷時(shí)扮演的

5、角色。
　　 方法:1.通過ELISA方法檢測LPS致傷后不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞分泌IL-6的量篩選合適的靶細(xì)胞。2.通過分子克隆和siRNA干擾方法過表達(dá)和沉默11β-HSD2，采用westernblot方法檢測效果，收集細(xì)胞上清液，應(yīng)用ELISA方法檢測IL-6表達(dá)量的變化。3.在前兩項(xiàng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果基礎(chǔ)上，收集LPS持續(xù)致傷時(shí)干涉11β-HSD2后48小時(shí)細(xì)胞上清，檢測IL-6的變化。
　　 結(jié)果:人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞是最適合的