“補(bǔ)腎生髓成肝”調(diào)控肝腎精虛大鼠肝再生的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:通過觀察體現(xiàn)“補(bǔ)腎生髓成肝”治療法則的院內(nèi)制劑(鄂藥制藥字Z20113160)對(duì)肝腎精虛/肝腎陰虛(MSG-肝再生-大鼠)模型肝再生的影響及機(jī)制,探討“補(bǔ)腎生髓成肝"調(diào)控肝再生改善肝腎精虛證的生物學(xué)基礎(chǔ),揭示慢性乙型肝炎肝腎陰虛證的科學(xué)內(nèi)涵和證候本質(zhì),明確“久病入腎"、“重病入腎”(慢性乙型肝炎肝腎陰虛證)的客觀依據(jù)和量化考核指標(biāo),為臨床采用骨髓干細(xì)胞移植或“補(bǔ)腎生髓成肝"聯(lián)合骨髓干細(xì)胞移植治療肝衰竭提供實(shí)驗(yàn)依據(jù),為慢性乙型肝炎肝

2、腎陰虛證的客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化和提高臨床療效提供科學(xué)依據(jù)。
　　 方法:wistar大鼠新生乳鼠于出生第2、4、6、8、10天時(shí)皮下注射左旋谷氨酸單鈉-生理鹽水溶液,劑量為每次4mg/g體重,生理鹽水對(duì)照組大鼠皮下注射等體積醫(yī)用生理鹽水,PHx組大鼠不作處理。28天后離乳,6周時(shí)隨機(jī)分為PHx組、生理鹽水對(duì)照組、假手術(shù)組、模型組和補(bǔ)腎生髓成肝組,補(bǔ)腎生髓成肝組大鼠按3g/kg劑量給予院內(nèi)制劑(鄂藥制藥字Z20113160)灌胃

3、,其余各組給予等量生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥兩周后行肝大部分切除術(shù)切除肝臟左葉和中葉,假手術(shù)組翻動(dòng)肝臟不切除。術(shù)后繼續(xù)給藥,在術(shù)后1天、3天、7天、10天時(shí)分別分析肝再生度、肝再生指數(shù)(％)和肝細(xì)胞分裂指數(shù)MI變化,觀察外周血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量,分析骨髓單個(gè)核細(xì)胞CD34/CD45雙陽性率的變化,觀察肝組織CD34表達(dá)情況,觀察肝組織和垂體纖維粘連蛋白FN的表達(dá)。病理切片拍照后用Image Pro-Plus6.0軟件進(jìn)行圖像處理,選定

4、分析區(qū)域,獲取平均光密度值MOD。所有數(shù)據(jù)均利用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.5中文版處理,多個(gè)樣本均數(shù)的組間比較采用多因素方差分析,根據(jù)軟件統(tǒng)計(jì)結(jié)果繪制圖表。
　　 結(jié)果:肝腎精虛大鼠肝再生過程嚴(yán)重失調(diào),表現(xiàn)為術(shù)后第1天肝再生亢進(jìn),肝再生度(0.34±0.10)顯著高于PHx組(0.22±0.08)和生理鹽水對(duì)照組(0.21±0.05),再生指數(shù)(1.88±0.14)高于PHx組(1.46±0.13)和生理鹽水對(duì)照組(1.47±0.1

5、8)、低于MSG-假手術(shù)組(3.40±0.11),肝細(xì)胞分裂指數(shù)MI(1.05±0.12)高于PHx組(0.86±0.16)和生理鹽水對(duì)照組(0.87±0.16)。中晚期肝再生過程則受到顯著抑制,術(shù)后第3、7和10天的肝再生度分別為0.42±0.08、0.57±0.12、0.70±0.08,低于PHx組和生理鹽水對(duì)照組;肝再生指數(shù)分別為2.07±0.04、2.41±0.06、2.84±0.10,低于PHx組、生理鹽水對(duì)照組和MSG-假手

6、術(shù)組;MI分別為1.04±0.18、0.41±0.16、0.15±0.03,明顯低于PHx組和生理鹽水對(duì)照組。最終模型組大鼠在肝再生度、再生指數(shù)和肝細(xì)胞分裂指數(shù)等方面均低于其它各組,不能恢復(fù)到正常水平。經(jīng)“補(bǔ)腎生髓成肝”的院內(nèi)制劑(鄂藥制藥字Z20113160)治療后,模型大鼠肝再生紊亂情況得到一定糾正。術(shù)后第1天肝再生度(0.13±0.07)低于模型組(0.34±0.10)和PHx組(0.22±0.08),肝再生指數(shù)(1.52±0.1

7、1)顯著低于模型組(1.88±0.14),肝細(xì)胞分裂指數(shù)MI(0.77±0.14)低于模型組(1.05±0.12),說明模型大鼠在肝再生早期的異常亢進(jìn)被抑制。術(shù)后第3、7和10天補(bǔ)腎生髓成肝成肝組大鼠肝再生度分別為0.50±0.05、0.74±0.06、0.86±0.03,與模型組比較顯著升高;肝再生指數(shù)分別為2.19±0.11、2.84±0.12、3.27±0.06,高于模型組;肝細(xì)胞分裂指數(shù)分別為1.89±0.13、0.57±0.2

8、0、0.28±0.04,顯著高于模型組。外周血紅細(xì)胞RBC計(jì)數(shù)和血紅蛋白Hb含量結(jié)果顯示,MSG-假手術(shù)組顯著低于生理鹽水組,模型組顯著低于MSG-假手術(shù)組,經(jīng)“補(bǔ)腎生髓成肝”方藥治療,補(bǔ)腎生髓成肝組外周血RBC計(jì)數(shù)、Hb含量恢復(fù)正常。流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示,術(shù)后1天、3天、7天、10天,模型組大鼠骨髓細(xì)胞中CD34/CD45雙陽性細(xì)胞率低于PHx組和生理鹽水對(duì)照組,差異具有顯著性,P＜0.05。給予“補(bǔ)腎生髓成肝”方藥治療,補(bǔ)腎生髓成

9、肝組大鼠骨髓CD34/CD45雙陽性細(xì)胞率明顯增加,在術(shù)后3天、7天、10天均顯著高于模型組,差異具有顯著性,P＜0.05。實(shí)驗(yàn)大鼠肝組織CD34的表達(dá)與骨髓CD34/CD45雙陽性細(xì)胞率的變化趨勢(shì)一致,術(shù)后1天、3天、7天、10天時(shí)模型組大鼠肝組織CD34的表達(dá)低于PHx組和生理鹽水對(duì)照組,差異具有顯著性,P＜0.05;補(bǔ)腎生髓成肝組大鼠肝組織CD34表達(dá)明顯增加,在術(shù)后3天、7天、10天均顯著高于模型組,差異具有顯著性,P＜0.05

10、。肝腎精虛大鼠(模型組)術(shù)后第1、3、7和10天肝組織FN平均密度值高于PHx組和生理鹽水對(duì)照組,差異具有顯著性,P＜0.05。補(bǔ)腎生髓成肝組術(shù)后第1、7和10天肝組織FN平均密度值低于模型組,差異具有顯著性,P＜0.05;術(shù)后3天的FN平均密度值高于模型組,差異具有顯著性,P＜0.05。模型組大鼠術(shù)后第1、3、7和10天垂體FN平均密度值高于PHx組和生理鹽水對(duì)照組,差異具有顯著性,P＜0.05。補(bǔ)腎生髓成肝組術(shù)后第1、7和10天垂體

11、FN平均密度值低于模型組,差異具有顯著性,P＜0.05;術(shù)后3天的FN平均密度值高于模型組,差異具有顯著性,P＜0.05。
　　 結(jié)論:肝腎精虛/肝腎陰虛(MSG-肝再生-大鼠)模型肝再生過程紊亂,表現(xiàn)為早期亢進(jìn),隨后受抑,最終不能恢復(fù)到正常的肝再生水平。經(jīng)“補(bǔ)腎生髓成肝”的院內(nèi)制劑(鄂藥制藥字Z20113160)治療后的模型大鼠的肝腎精虛證得到一定程度的改善,肝再生紊亂情況得到一定程度的糾正?！把a(bǔ)腎生髓成肝”調(diào)控肝腎精虛大鼠肝