CCL25-CCR9在大鼠心臟移植慢性排斥反應中的表達及意義.pdf

1、目的:近年來，隨著腦死亡患者心臟供體分配制度的建立和機械輔助循環(huán)的出現(xiàn)，限制心臟移植手術(shù)發(fā)展的供體短缺問題得到緩解，人們再次把目光聚焦于如何進一步提高心臟移植患者的遠期存活率。其中，移植心臟慢性排斥反應，即心臟移植物血管病和心肌纖維化是影響移植心臟長期存活的主要原因。研究表明，多種趨化因子與其受體在器官移植術(shù)后的排斥反應中起著重要作用，針對它們的結(jié)合進行靶向阻斷從而延緩移植器官慢性排斥反應成為當前的研究熱點。趨化因子CCL25是新近發(fā)現(xiàn)

2、的趨化因子CC亞家族成員，主要表達在胸腺和小腸上皮，對表達其特異性受體CCR9的炎性細胞有促進增殖和趨化的作用。目前，國內(nèi)外對CCL25/CCR9的研究多集中在類風濕性關(guān)節(jié)炎、炎癥性腸病、肝炎、腫瘤等領(lǐng)域，鮮見在心臟移植慢性排斥反應中的報道。本實驗通過采用anti-CCL25中和抗體靶向性阻斷CCL25與CCR9的結(jié)合，并檢測CCL25和CCR9在移植心臟中的表達情況，探討CCL25/CCR9與心臟移植慢性排斥反應的關(guān)系，為心臟移植慢性

3、排斥反應的治療提供依據(jù)。
　　方法:選取近交系Wistar大鼠為供者，SD大鼠為受者，采用“套管連接技術(shù)”行頸部心臟異位移植術(shù)。將受者隨機分為三組，每組10只。CsA組:移植術(shù)后當日腹腔內(nèi)注射CsA，10mg/kg，隔天1次，共10次。CsA+IgG組:CsA應用同CsA組，同時注射IgG抗體，0.1mg/kg，隔天1次，共10次。CsA+anti-CCL25組:CsA應用亦同CsA組，同時注射anti-CCL25中和抗體，0.1

4、 mg/kg，隔天1次，共10次。術(shù)后每天對受者頸部的移植心臟進行視診，并觸診其跳動力度，明確移植心臟的存活情況。于術(shù)后70d收獲移植心臟，制備石蠟切片，行HE、Van Gieson和天狼星紅染色觀察各組移植心臟的病理學改變，行免疫組化、Western blotting檢測分析CCL25和CCR9的表達水平。
　　結(jié)果:HE和Van Gieson染色可見:CsA組和CsA+IgG組的移植心臟較多心肌細胞出現(xiàn)變性壞死，冠狀動脈管腔狹

5、窄，個別甚至閉塞，大量炎性細胞浸潤，以心外膜下的血管周圍相對偏多，CsA+anti-CCL25組病理改變較CsA組和CsA+IgG組明顯減輕（P＜0.05）。天狼星紅染色示:CsA組和CsA+IgG組心肌間質(zhì)內(nèi)膠原纖維彌漫性增生，表現(xiàn)為深染的致密纖維束，CsA+anti-CCL25組膠原纖維呈疏松網(wǎng)狀分布，纖維化程度較前兩組明顯減輕(P＜0.05）。免疫組化切片顯示CCL25和CCR9蛋白在三組大鼠移植心臟中均呈陽性表達。Western

6、 blotting檢測三組CCL25及CCR9蛋白的表達水平與免疫組化檢測結(jié)果一致，CsA+ anti-CCL25組CCL25和CCR9蛋白的表達強度均明顯低于CsA組和CsA+IgG組（P＜0.05）。
　　結(jié)論:CCL25和CCR9在大鼠心臟移植慢性排斥反應中均有表達，兩者表達水平均與移植排斥反應程度成正相關(guān)，anti-CCL25中和抗體靶向性阻斷CCL25/CCR9可減輕移植心臟的慢性排斥反應，表明CCL25/CCR9在大鼠