CLC-3在大鼠異位心臟移植急性排斥期中的表達(dá)及意義.pdf

1、目前心臟移植已在臨床廣泛開(kāi)展，全世界心臟移植每年以4000例左右的手術(shù)量增加，并取得了良好的臨床療效果，出現(xiàn)了一定數(shù)量生存質(zhì)量高及長(zhǎng)期存活的群體。然而，急慢性免疫排斥反應(yīng)及應(yīng)用抗免疫排斥反應(yīng)藥物的負(fù)作用仍然是影響移植物功能、受體生存時(shí)間及生活質(zhì)量的關(guān)鍵因素。 細(xì)胞凋亡又稱程序性細(xì)胞死亡(programmed cell death，PCD)是一種主動(dòng)性細(xì)胞死亡方式，在維持心臟正常結(jié)構(gòu)形態(tài)及心臟病理性重構(gòu)方面有著重要的意義，在動(dòng)物

2、模型和人體心肌活檢及尸檢上的許多研究證實(shí)，心肌細(xì)胞凋亡廣泛存在于心臟移植急性免疫排斥反應(yīng)、移植物血管病及失活移植物中。 Bcl-2和Bax是一對(duì)與細(xì)胞凋亡最為密切的凋亡相關(guān)分子。Bcl-2和BaX的比值是決定細(xì)胞生死存亡的變阻器。Masashi以及Murray H等通過(guò)Bcl-2轉(zhuǎn)基因研究發(fā)現(xiàn)，高表達(dá)Bcl-2能減輕缺血再灌注損傷、急性免疫排斥反應(yīng)及移植冠狀動(dòng)脈血管病，減少心肌細(xì)胞凋亡。在不同細(xì)胞轉(zhuǎn)基因中的基礎(chǔ)研究發(fā)現(xiàn)

3、，Bcl-2還參與了眾多的離子通道功能的調(diào)節(jié)，高表達(dá)Bcl-2可增強(qiáng)細(xì)胞膜鈣離子的轉(zhuǎn)運(yùn)能力，抑制電壓門控鉀通道，激活容量激活氯通道。 離子轉(zhuǎn)運(yùn)在缺血再灌注損傷、細(xì)胞容積調(diào)節(jié)及凋亡中有著重要的意義，CLC-3屬于C1<'->通道家族β亞族，為電壓門控Cl<'->通道(vohage-gatedchloride channel)，目前關(guān)于CLC-3的研究雖然存在一些爭(zhēng)議，但多項(xiàng)研究提示C1C-3編碼了容積激活(volume-acti

4、vated)C<'->通道，廣泛分布于多種動(dòng)物及人的心血管組織中，參與眾多生理病理過(guò)程，并在心肌缺血預(yù)處理晚期保護(hù)作用中發(fā)揮重要作用。最新的研究表明CLC-3還參與了BcL-2家族在腫瘤細(xì)胞中的抗凋亡作用，并對(duì)野百合堿及毒胡羅卜素誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有拮抗作用。表明ClC－3在免疫調(diào)節(jié)、細(xì)胞凋亡中有著重要的意義，然而，關(guān)于CLC－3在心臟移植急性免疫排斥反應(yīng)、心肌細(xì)胞凋亡中的作用以及與Bcl－2家族的關(guān)系，目前尚不清楚。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)

5、建立大鼠異位移植心臟模型，旨在對(duì)CLC一3在大鼠異位移植心臟急性排斥期中的表達(dá)變化進(jìn)行初步的研究，以期初步了解CLC一3在移植心臟急性免疫排斥期中的作用，探討CLC一3與心臟移植急性免疫排斥反應(yīng)、心肌細(xì)胞凋亡及Bcl－2的關(guān)系及CLC一3在臟移植急性免疫排斥期中心肌細(xì)胞凋亡傳導(dǎo)途徑的作用機(jī)制。 方 法 建立大鼠腹部心臟異位移植模型，分對(duì)照組及環(huán)孢菌素(CsA)組，每組32對(duì)。術(shù)后當(dāng)天至術(shù)后7天或移植心臟停止搏動(dòng)，每

6、天分別灌胃給予生理鹽水及CsA(15mg/Kg)干預(yù)，每組8只用于觀察移植心存活時(shí)間，術(shù)后第1、3、5、7天各6只動(dòng)態(tài)切取標(biāo)本，常規(guī)組織切片監(jiān)測(cè)排斥反應(yīng)，TUNEL法檢測(cè)心肌細(xì)胞凋亡，免疫組織化法檢測(cè)Bcl－2和BAX的表達(dá)計(jì)算機(jī)圖像定量分析，免疫組化、RT—PCR、western blot檢測(cè)移植心肌組織CLC一3的表達(dá)及分布 1．C1C一3的表達(dá)隨免疫排斥反應(yīng)的加重，心肌細(xì)胞凋亡的增加明顯降低，推測(cè)CLC一3在不同的微環(huán)境下

7、通過(guò)快慢門控通道的不同開(kāi)放，不同離子通透性的選擇，調(diào)節(jié)細(xì)胞容積，引起調(diào)節(jié)性容積回縮和調(diào)節(jié)性容積增大，增加細(xì)胞穩(wěn)定性，以抵抗細(xì)胞腫脹壞死及細(xì)胞回縮凋亡。 2、CsA干預(yù)能明顯改善心臟移植急性免疫排斥反應(yīng)中C1C－3表達(dá)的降低，減輕心臟移植急性免疫排斥反應(yīng)，減少心肌細(xì)胞凋亡。CsA除抑制T淋巴細(xì)胞的增殖和分化，減輕免疫排斥反應(yīng)，尚可通過(guò)對(duì)鈣神經(jīng)素的抑制作用及細(xì)胞鈣代謝的影響對(duì)病理狀態(tài)下的心肌細(xì)胞容積激活C1￣通道進(jìn)行調(diào)解，減少心肌