黃芪白芍協(xié)同調控細胞抗氧化作用機制的研究.pdf

1、近年來，活性氧和自由基成為現代生命科學研究的前沿和熱點，評價和篩選具有抗氧化活性的天然資源也成為生物學、醫(yī)學和食品科學研究的新趨勢。我國中藥資源豐富，是天然抗氧化物質的重要來源，已引起國內外研究者的廣泛重視。研究發(fā)現黃芪、白芍具有良好的抗氧化特性，且二者配伍具有協(xié)同作用。
　　本課題組前期采用 HPLC-DPP H和 HP LC-DAD-MS/MS等方法從黃芪、白芍中篩選出七種具有協(xié)同抗氧化效果的成分，分別為：黃芪中的槲皮素、毛蕊

2、異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芒柄花素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、2’-羥基-3’,4’-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷和白芍中的兒茶素、羥基芍藥苷。因此，本研究主要內容如下：
　　1.測定了槲皮素、兒茶素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、羥基芍藥苷單一成分及兩兩組合對 DPPH和 ABTS自由基的清除能力。研究發(fā)現，槲皮素和兒茶素清除DPPH和ABTS自

3、由基能力較強，糖苷類物質毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、羥基芍藥苷清除自由基能力較弱；槲皮素和兒茶素在12.5μM濃度、1:1配比條件下呈現出較好的協(xié)同效應；槲皮素、兒茶素分別與毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、羥基芍藥苷組合也表現出顯著的協(xié)同增效作用。
　　2.研究了所選成分的細胞抗氧化作用。采用MTT實驗分析了槲皮素、兒茶素、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、羥基芍藥苷的細胞毒性。通過細胞抗氧化能力測定試驗，分析了所選成分的劑量效應、

4、時間效應和 CI值，最終篩選出槲皮素12.5μM與兒茶素12.5μM的濃度組合做進一步的研究。經過 H2O2誘導的細胞氧化應激模型驗證，發(fā)現槲皮素兒茶素具有協(xié)同保護細胞抗氧化的作用。
　　3.進一步分析發(fā)現，槲皮素、兒茶素協(xié)同抗氧化的作用機理可能與細胞內抗氧化酶的活性表達有關，因此分別采用A BAP和 H2 O2誘導的細胞氧化應激模型，分析了兩者組合對 SOD、GPx、CAT等抗氧化酶的活性以及 MDA含量的影響。結果表明，槲皮素

5、和兒茶素通過協(xié)同調控細胞中 SOD、GPx、CAT等抗氧化酶的活性表現出抗氧化作用。
　　4.為了進一步探究槲皮素和兒茶素協(xié)同調控細胞抗氧化作用的分子機制，采用H2 O2誘導的細胞氧化應激模型，分別用槲皮素、兒茶素及聯(lián)用組合分別處理細胞后提取總 RNA用于 RNA-seq轉錄組測序分析。通過 RNA-seq分析表達差異顯著的基因發(fā)現，槲皮素與兒茶素聯(lián)用可以協(xié)同調控細胞內抗氧化酶基因的表達，包括：SOD1、GPX2、PRX1、PRX