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文檔簡介
1、目的:卵巢癌的化療耐藥性是導(dǎo)致其臨床療效欠佳的重要因素之一,故明確其耐藥的分子機(jī)制,并且探尋有效逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥的分子靶點(diǎn)以及研制耐藥逆轉(zhuǎn)劑成為目前卵巢癌研究的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。糖原合成酶激酶3β(glycogen synthase kinase,GSK-3β)是近年來備受關(guān)注的腫瘤治療的分子靶點(diǎn)之一,因此本研究擬探討糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)對(duì)卵巢癌化療耐藥性的影響及其可能的機(jī)制,為其成為逆轉(zhuǎn)卵巢癌耐藥的分子靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
2、 方法:首先運(yùn)用氯化鋰(Lithium chloride,LiCl)增加失活性GSK-3β即p-GSK-3β(ser9)的水平,構(gòu)建高表達(dá)p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌細(xì)胞模型。隨后采用MTT法篩選合適的LiCl濃度和作用時(shí)間作為后續(xù)實(shí)驗(yàn)LiCl的預(yù)處理,同樣用MTT法分別檢測順鉑和紫杉醇的半數(shù)抑制濃度(IC50)。接著使用流式細(xì)胞儀檢測LiCl處理前后SKOV3細(xì)胞內(nèi)p-GSK-3β(ser9)的表達(dá)量。最后聯(lián)合免疫熒光技術(shù)觀
3、察LiCl預(yù)處理對(duì)卵巢癌細(xì)胞SKOV3內(nèi)p-GSK-3β(ser9)定位情況的影響。
結(jié)果:依據(jù)MTT結(jié)果選擇LiCl20 mmol/L處理6h作為構(gòu)建高表達(dá)p-GSK-3β(ser9)的卵巢癌細(xì)胞模型的條件。LiCl預(yù)處理后,24、48、72 h SKOV3細(xì)胞順鉑的半數(shù)抑制濃度從(20.37±0.56)、(7.79±0.72)、(2.8±0.32)μ g/ml增加至(27.57±0.81)(t=12.66, P=O.000
4、2)、(12.15±1.00)(t=6.13,P=0.0036)、(5.84±0.64)(t=7.36,P=0.0019)μ g/ml,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。LiCl20mmol/L預(yù)處理后,24、48、72h SKOV3細(xì)胞紫杉醇的半數(shù)抑制濃度從(10.11±0.87)、(1.07±0.17)、(0.03±0.01)μ g/ml增加至(12.54±0.88)(t=3.4, P=O.02)、(2.22±0.3)(t=5.78, P=O.0
5、045)、(0.093±0.03)(t=3.45,P=0.026)μ g/ml,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。流式的結(jié)果顯示,LiCl預(yù)處理后SKOV3細(xì)胞內(nèi)p-GSK-3β(ser9)的平均熒光強(qiáng)度由661.67±37.63增加到1191.33±30.37,失活性磷酸化GSK-3β的水平顯著升高,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。免疫熒光的結(jié)果則提示,LiCl預(yù)處理后SKOV3細(xì)胞內(nèi)p-GSK-3β(ser9)的水平有所上調(diào),并且細(xì)胞核內(nèi)的上調(diào)效應(yīng)較為明顯。
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