人卵巢癌類干細(xì)胞化療耐藥及逆轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文人卵巢癌類干細(xì)胞化療耐藥及逆轉(zhuǎn)的實(shí)驗(yàn)研究姓名：趙庶君申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：婦產(chǎn)科學(xué)指導(dǎo)教師：周欣200904012、細(xì)胞培養(yǎng)提取卵巢癌類干細(xì)胞富集的細(xì)胞團(tuán)：將OVCAR3細(xì)胞從含15％FBS的DMEM培養(yǎng)液中取出，種于鋪有瓊脂的6厘米培養(yǎng)皿中，加入無血清的DMEM／F12培養(yǎng)液，隔天半量換液，45天形成細(xì)胞團(tuán)，傳數(shù)代后形成富集卵巢癌類干細(xì)胞的細(xì)胞團(tuán)。3、用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法檢測化療藥物對OVCAR3和卵

2、巢癌類干細(xì)胞的抑制作用及維拉帕米對其的影響OVCAR3細(xì)胞或卵巢癌類干細(xì)胞的單細(xì)胞懸液每孔100pL，含有細(xì)胞數(shù)為6000化療藥每孑L101xL，DMEM培養(yǎng)液每孑L90rtL。陰性對照組不加抗癌藥，空白對照組每孔只]JH200ItL培養(yǎng)液。重復(fù)實(shí)驗(yàn)三次，測定每次的相對抑制率。4、用軟瓊脂克隆實(shí)驗(yàn)檢測OVCAR3細(xì)胞和卵巢癌類干細(xì)胞對阿霉素及順鉑的抑制率及維拉帕米對其的影響。方法如下：下層O6％濃度的瓊脂中不含有細(xì)胞，上層03％濃度的瓊

3、脂中含有OVCAR3細(xì)胞或卵巢癌類干細(xì)胞。表面覆蓋條件液(條件液中含有化療藥物)。3周后觀察形成的克隆數(shù)。重復(fù)上述實(shí)驗(yàn)三次，收集數(shù)據(jù)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果1、培養(yǎng)出的卵巢癌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察具有干細(xì)胞的生長特點(diǎn)，前期實(shí)驗(yàn)中己驗(yàn)證其具有干細(xì)胞特點(diǎn)。卵巢癌類干細(xì)胞懸浮生長，形成干細(xì)胞樣細(xì)胞團(tuán)。2、MTT檢測結(jié)果卵巢癌類干細(xì)胞與OVCAR3細(xì)胞相比，對阿霉素和順鉑有耐藥性(Po05)，維拉帕米能夠在一定程度上逆轉(zhuǎn)卵巢癌類干細(xì)胞的耐藥性(PO0