EML4-ALK融合基因陽性人肺腺癌H2228細胞株對克唑替尼耐藥前后stat3-survivin信號通路的檢測.pdf

1、目的:探討EML4-ALK融合基因陽性人肺腺癌H2228細胞株對克唑替尼(crizotinib)耐藥前后stat3/survivin信號通路的變化及其調控機制。
　　方法:采用噻唑藍(MTT)法檢測克唑替尼對H2228細胞增殖的抑制作用，計算IC50;采用濃度梯度遞增法誘導H2228耐藥細胞株(H2228crizotinib resistance，H2228 CR)，并測定其耐藥指數(shù);采用流式細胞術檢測克唑替尼分別作用于H2228

2、親本細胞和耐藥細胞24 h、48 h、72 h后的凋亡率，用蛋白質免疫印跡(Western blot，WB)的方法檢測0 nmol/L、0.3 nmol/L及0 nmol/L、0.3 nmol/L、1μmol/L濃度的克唑替尼分別作用于H2228親本細胞和耐藥細胞72 h后p-ALK、ALK和stat3/survivin信號通路中p-stat3、stat3和survivin各蛋白表達量及活化水平的變化;對H2228親本細胞和H2228耐

3、藥細胞進行基因測序。
　　結果:克唑替尼以時間依賴性方式抑制H2228細胞的增殖。克唑替尼作用H2228親本細胞和H2228耐藥細胞72小時的IC50值分別為334.5nmol/L和3418nmol/L。H2228耐藥細胞的耐藥指數(shù)為10.20?？诉蛱婺釋2228細胞有促凋亡作用(P＜0.05），且能使H2228細胞中的融合蛋白EML4-ALK V3的活化形式p-ALK明顯受到抑制，其下游的p-stat3及存活蛋白survivi

4、n的表達呈下降趨勢，但克唑替尼對H2228耐藥細胞株不具有促凋亡作用，且不能使p-ALK的表達受到抑制，下游通路stat3的活化水平及存活蛋白survivin的表達無下降趨勢。對應EML4-ALK V3b2067、2182這2個位置的G、G堿基分別突變?yōu)锳、C堿基。
　　結論:克唑替尼以時間依賴的方式抑制人肺腺癌細胞株H2228的增殖?？诉蛱婺嵴T導的H2228細胞凋亡可能與stat3/survivin通路有關，并能下調p-ALK、