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文檔簡介
1、人C型凝集素樣受體(human C-type lectin-like receptor-2,hCLEC-2)是新克隆的Ⅱ型跨膜受體分子,研究表明它在病毒感染,血小板活化、聚集,腫瘤轉(zhuǎn)移和信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等方面發(fā)揮重要作用。我們希望通過制備針對其胞外段CRD結(jié)構(gòu)域的抗體來進一步研究該蛋白質(zhì)的生物學功能及相關(guān)信號通路。因此,我們構(gòu)建了pET23b-CRD重組表達質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中,用于hCLEC-2-CRD-His融合蛋白的表達,經(jīng)
2、聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測表明,融合重組蛋白成功獲得了高效表達,分子量在18 KD左右。經(jīng)鑒定,我們發(fā)現(xiàn)hCLEC-2-CRD-His表達于包涵體中。為獲得高純度的可溶性蛋白,我們將包涵體溶于6 M鹽酸胍,并用鎳珠進行純化。純化后的蛋白經(jīng)過透析后作為抗原,免疫新西蘭兔制備抗血清,抗血清經(jīng)蛋白G親合層析純化后,用Western Blot等方法進行鑒定,結(jié)果顯示該抗體能特異性地檢測到轉(zhuǎn)染表達的GFP-hCLEC-2和GFP-CRD。通過使用該抗
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