奧拉西坦對(duì)奧美拉唑在大鼠和健康志愿者體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響.pdf

1、奧美拉唑(Omeprazol，OME)化學(xué)名稱(chēng)：5-甲氧基-2-[[(4-甲氧基-3，5-二甲基-2-吡啶)甲基]亞砜]-1H-苯并咪唑，是一個(gè)經(jīng)典的質(zhì)子泵抑制劑。它作用于胃壁上的泌酸細(xì)胞，廣泛用于治療多種酸相關(guān)性胃腸道病癥及治療幽門(mén)螺旋桿菌感染的疾病。奧美拉唑通過(guò)肝臟微粒體細(xì)胞色素P450氧化酶系統(tǒng)代謝，與CYP2C19酶特異性結(jié)合，代謝產(chǎn)物為5-羥基奧美拉唑和奧美拉唑磺?；?。奧拉西坦(oxiracetam，ORC)是一種環(huán)γ-氨基

2、丁酸類(lèi)促智藥，作用于谷氨酸鹽促代謝受體，防止谷氨酸所致的神經(jīng)毒性，還可促進(jìn)磷酰膽堿和磷酰乙醇合成，提高大腦對(duì)葡萄糖和氧的利用及三磷酸腺苷/二磷酸腺苷的比值，使大腦中核酸和蛋白質(zhì)的合成增加，研究顯示，奧拉西坦能夠很好的改善記憶和學(xué)習(xí)功能。奧美拉唑目前作為國(guó)內(nèi)治療反流性食管炎、消化性潰瘍等與酸相關(guān)的胃腸道疾病的一線(xiàn)藥物，已被廣泛接受。其代謝途徑已經(jīng)明確，其藥代動(dòng)力學(xué)和生物等效性也有相應(yīng)的研究。但有關(guān)奧拉西坦對(duì)奧美拉唑體內(nèi)代謝的影響，國(guó)內(nèi)外尚

3、無(wú)任何研究資料。本實(shí)驗(yàn)擬建立大鼠及人血漿中奧美拉唑的HPLC測(cè)定方法，旨在研究大鼠及人口服奧美拉唑后體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)特征，從而進(jìn)一步研究奧拉西坦對(duì)奧美拉唑在大鼠和人體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響，從而為臨床聯(lián)合用藥提供理論依據(jù)。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：奧拉西坦對(duì)奧美拉唑在大鼠體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　目的：建立奧美拉唑在大鼠體內(nèi)血藥濃度的HPLC測(cè)定方法，并對(duì)兩組分別給予安慰劑+奧美拉唑和奧拉西坦+奧美拉唑的大鼠進(jìn)行奧美拉唑血

4、藥濃度的測(cè)定，考察兩藥合用后藥代動(dòng)力學(xué)的特征，從而確定奧拉西坦對(duì)奧美拉唑在大鼠體內(nèi)藥動(dòng)學(xué)的影響。
　　方法：⑴給藥方法及血漿樣品采集：雄性SD大鼠16只，隨機(jī)分為兩組，每組8只。實(shí)驗(yàn)組按200mg/kg給予奧拉西坦，每日2次灌胃，連續(xù)5天；對(duì)照組給予等量蒸餾水，每日2次灌胃，連續(xù)5天。第6日，給予奧美拉唑20mg/kg，于不同的時(shí)間點(diǎn)取血，-40℃保存。⑵血漿樣品處理：取血漿200μl，加0.1mol/L NaOH溶液50μl，加

5、內(nèi)標(biāo)(20μg/ml卡馬西平的甲醇溶液)10μl，混勻后，加二氯甲烷2ml，渦旋震蕩1min，3000rpm離心，棄上清液，取有機(jī)層，于40℃水浴氮?dú)饬鞔蹈桑?00μl甲醇溶解進(jìn)樣。⑶色譜條件：Diamonsil C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5.0μm)，柱溫25℃，流動(dòng)相乙腈-水(50:50)，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)302nm，進(jìn)樣量20μl。⑷最低定量限及最低檢測(cè)限的確定：用倍比稀釋法確定最低定量限及最低檢測(cè)

6、限。⑸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備：配制0.01，0.025，0.05，0.1，0.25，0.5，1.0μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣。以?shī)W美拉唑與內(nèi)標(biāo)的峰面積比值(Y)對(duì)血漿藥物濃度(X)回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。⑹回收率：分別制備濃度為0.025，0.1，0.5μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品各5份，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣，奧美拉唑峰面積與等量奧美拉唑?qū)φ掌啡芤褐苯舆M(jìn)樣的峰面積比值，即得奧美拉唑的提取回收率；內(nèi)標(biāo)峰面

7、積與等量?jī)?nèi)標(biāo)溶液直接進(jìn)樣的峰面積比值，即得內(nèi)標(biāo)提取回收率；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算的測(cè)得濃度與理論濃度的比值，即得方法回收率。⑺精密度：分別制備濃度為0.025，0.1，0.5μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品各5份，分別于一日內(nèi)0，1，2，3，4h處理并測(cè)定，計(jì)算日內(nèi)精密度；于0，1，2，3，4日處理并測(cè)定，計(jì)算日間精密度。⑻穩(wěn)定性：0.1μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品處理后，分別于0，1，2，3，4h測(cè)定，考察處理樣品穩(wěn)定性；0.1μg

8、/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品即刻處理并測(cè)定或-40℃低溫避光保存7天后處理并測(cè)定，考察低溫保存穩(wěn)定性；0.1μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品即刻處理或反復(fù)凍融3次后處理，分別測(cè)定，考察反復(fù)凍融穩(wěn)定性。⑼藥代動(dòng)力學(xué)分析：大鼠血漿樣品按血漿樣品處理方法處理并測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算血漿藥物濃度，用DAS2.1.1藥代動(dòng)力學(xué)軟件對(duì)大鼠藥-時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，求算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。對(duì)兩組參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，看有無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)果：①奧美

9、拉唑保留時(shí)間為4.6min，卡馬西平保留時(shí)間為5.7min，血漿內(nèi)源性物質(zhì)不干擾奧美拉唑和卡馬西平的測(cè)定。②標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程：Y=1.3295X+0.0043，相關(guān)系數(shù)r=0.9993，奧美拉唑血漿藥物濃度在0.01～1.0μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，最低定量限為0.005μg/ml，最低檢測(cè)限為0.001μg/ml。③回收率：低、中、高三種不同濃度的奧美拉唑血漿樣品的提取回收率分別(85.31±4.49)％，(83.27±2.73)％和

10、(90.71±7.43)％，RSD值分別為5.26％，3.28％和8.19％；內(nèi)標(biāo)提取回收率為(91.64±5.60)％，RSD值為6.11％；方法回收率分別為(90.65±4.25)％，(100.31±8.64)％和(100.23±5.33)％，RSD值分別為4.69％，8.61％和5.31％。④精密度：日內(nèi)精密度結(jié)果顯示，低、中、高三種濃度血漿樣品的RSD值分別為4.19％，4.97％和3.81％；日間精密度的RSD值分別為4.14

11、％，3.51％和4.06％。⑤穩(wěn)定性：血漿樣品低溫保存7天或反復(fù)凍融3次性質(zhì)穩(wěn)定，RSD值分別為4.62％和7.84％；處理血漿樣品放置4h對(duì)測(cè)定無(wú)影響，RSD值為4.71％。⑥藥代動(dòng)力學(xué)特征：對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組大鼠按既定方案給藥后，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：T1/2分別為47.09±18.65min，27.31±12.64min；AUC(0-t)分別為26.23±15.41 mg·min/L，41.47±22.85mg·min/L；AUC(0-

12、∞)分別為27.58±15.44mg·min/L，42.23±22.41mg·min/L；CL/F分別為0.997±0.650L/min/kg，0.628±0.377L/min/kg：Cmax分別為0.477±0.213mg/L，0.804±0.531mg/L；Tmax分別為45.0±0.0min，46.88±5.30min；V/F分別為77.24±69.65L/kg，30.09±30.344L/kg。
　　結(jié)論：⑴建立了大鼠血漿

13、中奧美拉唑濃度的HPLC測(cè)定方法，該方法能使奧美拉唑和內(nèi)標(biāo)有良好的分離，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)對(duì)測(cè)定結(jié)果沒(méi)有影響；血漿樣品低溫保存7天或反復(fù)凍融3次性質(zhì)穩(wěn)定，處理血漿樣品放置4h對(duì)測(cè)定無(wú)影響；該測(cè)定方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確、重現(xiàn)性好，適用于大鼠血漿中奧美拉唑的含量測(cè)定。⑵大鼠在給予安慰劑或奧拉西坦達(dá)到穩(wěn)態(tài)后再給予奧美拉唑，兩組的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)AUC(0-t)、AUC(0-∞)、CL/F、Cmax、Tmax、V/F，P值均大于0.05，T1/2的P值小于

14、0.05。因此，本實(shí)驗(yàn)結(jié)論為在大鼠體內(nèi)奧拉西坦影響奧美拉唑的代謝，使奧美拉唑的半衰期縮短。
　　第二部分：奧拉西坦對(duì)奧美拉唑在健康志愿者體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的影響。
　　目的：建立奧美拉唑在健康志愿者體內(nèi)血藥濃度的HPLC測(cè)定方法，并對(duì)兩組分別給予安慰劑+奧美拉唑和奧拉西坦+奧美拉唑的健康志愿者進(jìn)行奧美拉唑血藥濃度的測(cè)定，考察兩藥合用后藥代動(dòng)力學(xué)的特征。
　　方法：⑴給藥方法及血漿樣品采集：8名男性健康受試者隨機(jī)分為2組，每

15、組4人。試驗(yàn)組口服奧拉西坦膠囊，每次0.8g，每日2次，連續(xù)服用6天：對(duì)照組每天口服空膠囊，每日2次，連續(xù)服用6天。第7日，給予奧美拉唑40mg，于不同的時(shí)間點(diǎn)取血，-40℃保存。⑵血漿樣品處理：取血漿500μl，加磷酸鹽緩沖液(PH=7.83)100μl，加內(nèi)標(biāo)溶液(卡馬西平的甲醇溶液，4μg/m1)50μl，混勻后，加二氯甲烷5ml，渦旋震蕩1min，3000rpm離心，棄上清液，取有機(jī)層，40℃水浴氮?dú)饬鞔蹈桑?00μl甲醇溶解進(jìn)

16、樣。⑶色譜條件：Diamonsil(R)C18色譜柱(250 mm×4.6 mm，5.0μm)，柱溫25℃，流動(dòng)相乙腈-水(45:55)，流速1.0ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)302nm，進(jìn)樣量20μl。⑷最低定量限及最低檢測(cè)限的確定：用倍比稀釋法確定最低定量限及最低檢測(cè)限。⑸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制備：配制0.01，0.05，0.1，0.25，0.5，1.0，2.0，3.0μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣。以?shī)W美拉唑與內(nèi)標(biāo)

17、的峰面積比值(Y)對(duì)血漿藥物濃度(X)回歸標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程。⑹回收率：分別制備濃度為0.05，0.25，2.0μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品，按血漿樣品處理方法處理后進(jìn)樣，奧美拉唑峰面積與等量奧美拉唑?qū)φ掌啡芤褐苯舆M(jìn)樣的峰面積比值，即得奧美拉唑的提取回收率；內(nèi)標(biāo)峰面積與等量?jī)?nèi)標(biāo)甲醇溶液直接進(jìn)樣的峰面積比值，即得內(nèi)標(biāo)提取回收率；根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算的測(cè)得濃度與理論濃度的比值，即得方法回收率。⑺精密度：分別制備濃度為0.05，0.25，2.0

18、μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品，分別于一日內(nèi)0，1，2，3，4h處理并測(cè)定，計(jì)算日內(nèi)精密度；于0，1，2，3，4日處理并測(cè)定，計(jì)算日間精密度。⑻穩(wěn)定性：0.25μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品處理后，分別于0，1，2，3，4h測(cè)定，考察處理樣品穩(wěn)定性；0.25μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品即刻處理并測(cè)定或-40℃低溫避光保存4天后處理并測(cè)定，考察低溫保存穩(wěn)定性；0.25μg/ml的奧美拉唑模擬血漿樣品即刻處理或反復(fù)凍融3次后處理，分

19、別測(cè)定，考察反復(fù)凍融穩(wěn)定性。⑼藥代動(dòng)力學(xué)分析：健康志愿者血漿樣品按血漿樣品處理方法處理并測(cè)定，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程計(jì)算血漿藥物濃度，用DAS2.1.1藥代動(dòng)力學(xué)軟件對(duì)藥-時(shí)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理，求算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)。對(duì)兩組參數(shù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，看有無(wú)顯著性差異。
　　結(jié)果：①奧美拉唑保留時(shí)間為5.9min，卡馬西平保留時(shí)間為7.6min，血漿內(nèi)源性物質(zhì)不干擾奧美拉唑和卡馬西平的測(cè)定。②標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)方程：Y=3.2214X-0.0148，相關(guān)系數(shù)r=0

20、.9999，奧美拉唑血漿藥物濃度在0.01～3.0μg/ml范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，最低定量限為0.005μg/ml，最低檢測(cè)限0.001μg/ml。③回收率：低、中、高三種不同濃度的奧美拉唑血漿樣品的提取回收率分別(78.63±3.84)％，(82.61±1.88)％和(74.54±1.93)％，RSD值分別為4.89％，2.27％和2.59％：內(nèi)標(biāo)提取回收率為(86.53±4.29)％，RSD值為4.95％；方法回收率分別為(98.97

21、±2.07)％，(99.48±2.14)％和(92.67±1.10)％，RSD值分別為2.09％，2.15％和1.19％。④精密度：日內(nèi)精密度結(jié)果顯示，低、中、高三種濃度血漿樣品的RSD值分別為2.79％，5.37％和1.00％；日間精密度的RSD值分別為4.14％，3.95％和2.47％。⑤穩(wěn)定性：血漿樣品低溫保存4天或反復(fù)凍融3次性質(zhì)穩(wěn)定，RSD值分別為2.10％和2.59％；處理血漿樣品放置4h對(duì)測(cè)定無(wú)影響，RSD值為3.87％。

22、⑥藥代動(dòng)力學(xué)特征：8位健康志愿者按既定方案給藥后，藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)如下：T1/2分別為1.496±0.834h，1.656±0.694h；AUC(0-t)分別為3.317±3.077mg·h/L，3.687±3.150mg·h/L；AUC(0-∞)分別為3.327±3.228mg·h/L，3.787±3.291mg·h/L；CL/F分別為11.819±7.756 L/h/kg，8.277±4.236L/h/kg：Cmax分別為1.136±

23、0.774 mg/L，1.324±0.598mg/L；Tmax分別2.313±1.100h，2.0±0.845h；V/F分別為19.53±10.62L/kg，17.70±10.19L/kg。
　　結(jié)論：⑴建立了健康志愿者血漿中奧美拉唑濃度的HPLC測(cè)定方法，該方法能使奧美拉唑和內(nèi)標(biāo)分離良好，縮短了保留時(shí)間和檢測(cè)時(shí)間，血漿中內(nèi)源性雜質(zhì)不干擾測(cè)定結(jié)果；測(cè)定方法準(zhǔn)確性、重現(xiàn)性均良好，且簡(jiǎn)單快捷；血漿樣品低溫保存4天或反復(fù)凍融3次對(duì)測(cè)定結(jié)