陰陽互根理論在腎虛證中的臨床應(yīng)用及機(jī)制探討.pdf

1、目的:
　　陰陽學(xué)說是中醫(yī)學(xué)理論的基石和源頭，然而迄今為止其科學(xué)內(nèi)涵尚未完全闡述明確?！端貑枴り庩枒?yīng)象大論》說:“陰陽者，天地之道也，萬物之綱紀(jì)，變化之父母，生殺之本始，神明之府也，治病必求于本?！敝赋鲫庩柕膶α⒔y(tǒng)一運動是萬事萬物之本源，世界上一切事物發(fā)生、發(fā)展、變化及消亡的根本原因。王冰注《素問·生氣通天論》曰:“陽氣根于陰，陰氣根于陽，無陰則陽無以生，無陽則陰無以化?！币馑际钦f陰陽不僅有對立的關(guān)系，還具有統(tǒng)一的關(guān)系，即相互依存

2、、相互資生的關(guān)系，這就是陰陽的“互根互用”理論。陰陽互根互用理論是陰陽學(xué)說的重要組成部分，在此基礎(chǔ)上，明代張景岳提出了著名的“善補(bǔ)陽者必于陰中求陽，則陽得陰助而生化無窮;善補(bǔ)陰者必于陽中求陰，則陰得陽升而化源不竭”——即“陰中求陽，陽中求陽”的治療方法，同時創(chuàng)制出“陰中求陽”之右歸丸治療腎陽虛證、“陽中求陰”之左歸丸治療腎陰虛證，具有重大理論與臨床意義，是陰陽互根互用理論在調(diào)理腎中陰陽臨床實踐上的具體應(yīng)用，但是目前腎中陰陽互根互用的機(jī)制

3、尚未完全闡明。
　　陰陽學(xué)說的現(xiàn)代研究中最受關(guān)注的是美國生物學(xué)家Glodberg于1975首次提出的環(huán)磷酸腺苷(cAMP)與環(huán)磷酸鳥苷(cGMP)的陰陽假說。隨后國際上Cell、Science、Nat Cell Biol、Nat Rev Rheumatol、Proc Natl Acad Sci USA以及Circ Res等一系列著名的科學(xué)雜志都陸續(xù)刊登了應(yīng)用陰陽概念探討概念來探討免疫與炎癥、氧化與抗氧化、蛋白磷酸化信號傳導(dǎo)通路、核

4、轉(zhuǎn)錄因子(Yin-Yang1、E2F-1、MeCP2)抑制與激活等細(xì)胞內(nèi)的諸多事件。這些結(jié)果在細(xì)胞水平上表明了陰陽學(xué)說的普適性與科學(xué)性。國內(nèi)外既往研究中關(guān)于功能拮抗性的物質(zhì)與陰陽對立制約的關(guān)系的報道較多，但鮮有關(guān)于陰陽互根互用方面的現(xiàn)代研究。
　　中醫(yī)“證”是疾病發(fā)生過程中不同階段病因病機(jī)的高度概括，由于同一證有其共同的臨床表達(dá)和病理機(jī)制，那么我們可以推斷其肯定有著共同的物質(zhì)基礎(chǔ)。而生命的中心法則認(rèn)為基因型（DNA或基因）處于最原

5、始和本質(zhì)的地位，腎所藏之精稟受于父母，是構(gòu)成胚胎發(fā)育的原始物質(zhì)，與現(xiàn)代醫(yī)學(xué)的遺傳物質(zhì)DNA具有同一性。本課題組在前期的腎陰虛證相關(guān)基因、腎陰虛證和腎陽虛證基因表達(dá)譜的比較研究中，通過西醫(yī)的辨病與中醫(yī)的辨證相結(jié)合，從慢性腎炎、糖尿病腎病、狼瘡性腎炎以及亞健康狀態(tài)等的腎虛證入手，提取外周血白細(xì)胞RNA和DNA，應(yīng)用基因芯片、抑制性消減雜交(SSH)、基因多態(tài)性分析和基因克隆等技術(shù)和方法，系統(tǒng)地開展了腎陰虛證、腎陽虛證的相關(guān)基因研究，成功地構(gòu)

6、建了腎陰虛證的cDNA文庫，結(jié)果發(fā)現(xiàn)不同病種腎陰虛證的消減文庫中存在明顯差異;腎陰虛證組和正常對照組間存在79條差異表達(dá)基因;腎陽虛證組和正常對照組間存在75條差異表達(dá)基因;腎陰虛證和腎陽虛證與正常對照比較存在9條共同差異表達(dá)基因。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腎陰虛證、腎陽虛證具有各自不同的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，提示腎中陰陽有不同的物質(zhì)基礎(chǔ)，使其表現(xiàn)為對立制約的關(guān)系;然而它們又有共同的基因表達(dá)調(diào)控網(wǎng)絡(luò)，提示腎中陰陽有共同的物質(zhì)基礎(chǔ)，使其表現(xiàn)為互根互用的關(guān)

7、系。因此，從基因組學(xué)方面深入探討腎虛證的分子機(jī)制對于闡明腎虛證的本質(zhì)有著至關(guān)重要的意義，可能是闡明腎中陰陽互根理論的重要突破口之一。
　　綜上所述，本研究擬在前期研究工作的基礎(chǔ)上，將具有濃郁中醫(yī)特色的“陰中求陽、陽中求陰”臨床拆方治療及現(xiàn)代指標(biāo)觀察相結(jié)合的途徑，通過對腎虛證患者服藥前后的臨床觀察，熒光定量PCR監(jiān)測腎陰虛證與腎陽虛證的共同差異表達(dá)基因，免疫功能測試等，開展對腎陰虛證和腎陽虛證的相關(guān)研究，以進(jìn)一步驗證陰陽的互根互用理

8、論，利用現(xiàn)代技術(shù)，探尋腎虛證的本質(zhì)，闡述其作用機(jī)制，為中醫(yī)證候研究提供科學(xué)依據(jù)。
　　方法:
　　(1)系統(tǒng)回顧與總結(jié)腎中陰陽互根的中醫(yī)理論及中西醫(yī)治療腎陰虛、腎陽虛證的現(xiàn)狀;
　　(2)采用“病證結(jié)合”方法，選取慢性腎小球腎炎及糖尿病的腎陰虛證、腎陽虛證患者以及選擇性別、年齡等人口學(xué)資料相似的健康的正常人共同作為研究對象。按照“陰中求陽、陽中求陰”的治療方法，對相應(yīng)的中藥復(fù)方（左歸丸、右歸丸）進(jìn)行拆方研究:將腎陰虛證

9、患者隨機(jī)分為陽中求陰（即左歸丸）治療組和滋補(bǔ)腎陰（即左歸丸之滋腎陰中藥復(fù)方）治療組;將腎陽虛證患者隨機(jī)分為陰中求陽（即右歸丸）治療組、溫補(bǔ)腎陽（即右歸丸之溫腎陽中藥復(fù)方）治療組，觀察給藥前后相應(yīng)的臨床指標(biāo)變化。
　　(3)通過對左歸丸、左歸丸中滋腎陰中藥、右歸丸，右歸丸中溫腎陽中藥及健康對照組服藥前后淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗，NK細(xì)胞活性測定，外周血白細(xì)胞、血清抗體、補(bǔ)體及淋巴細(xì)胞亞群觀察等進(jìn)行觀察，對實驗各組進(jìn)行相關(guān)免疫分析。
　

10、　(4)收集不同組治療前后外周血白細(xì)胞總RNA，制備樣品，利用熒光定量PCR技術(shù)觀察腎陰虛證、腎陽虛證與正常人服藥前后白細(xì)胞的特定基因表達(dá)變化，通過統(tǒng)計軟件，對左歸丸、右歸丸治療作用相關(guān)的基因表達(dá)的變化進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　1.系統(tǒng)回顧與總結(jié)了腎中陰陽互根的中醫(yī)理論基礎(chǔ);
　　2.臨床觀察結(jié)果:
　　(1)將腎陰虛證患者隨機(jī)分為陽中求陰（即左歸丸）治療組、滋補(bǔ)腎陰（即左歸丸之滋腎陰中藥復(fù)方）治療組進(jìn)行臨床觀

11、察:
　?、僦饕R床癥狀及舌象脈象觀察:60例腎陰虛證的主要臨床癥狀依次是:手足心熱52例（占86.7％）、腰部酸痛33例（占55％）、腿膝酸軟46例（占76.7％）、五心煩熱43例（占71.7％）、潮熱35例（占58.3％）、盜汗28例（占46.7％）、咽喉干燥23例（占38.3％）、失眠15例（占25％）、耳鳴18例（占60％），另外還有牙齒松動、月經(jīng)過少等癥狀，出現(xiàn)頻率較少見。
　　舌象情況:60例腎陰虛證中，舌質(zhì)紅4

12、6例(76.7％)，舌上有裂紋9例(15％)，舌質(zhì)暗紅包括舌有瘀點5例(8.3％)。舌苔出現(xiàn)頻數(shù)最多的是少苔43例(71.7％)，其后依次為無苔11例(18.3％)，薄黃苔5例(8.3％)，苔黃膩1例(1.7％)。
　　脈象情況:60例腎陰虛證中，脈數(shù)28例(46.7％)，脈細(xì)21例(35％)，脈弦8例(13.3％)，脈緩出現(xiàn)的較少，為3例(5％)。從脈象性質(zhì)看，腎陰虛證多表現(xiàn)為細(xì)脈及數(shù)脈。
　　②兩組臨床療效比較經(jīng)秩和檢驗

13、分析，Z=-1.975，P=0.048＜0.05，兩組療效差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示左歸丸組療效優(yōu)于左歸丸之滋腎陰對照組;
　　兩組治療前后癥狀積分比較組內(nèi)比較用配對t檢驗，治療前兩組組間比較用方差分析，兩組治療后積分比較使用協(xié)方差分析。結(jié)果表明，治療前兩組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異，治療后組內(nèi)比較配對t檢驗發(fā)現(xiàn)兩組治療前后癥狀積分的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t治療組=18.139，t對照組=7.732，P＜0.01），治療組與對照組的干預(yù)后癥狀

14、積分比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=62.413，P＜0.01），說明治療組在改善腎陰虛證癥狀方面優(yōu)于對照組。
　　(2)將腎陽虛證患者隨機(jī)分為陰中求陽（即右歸丸）治療組、溫補(bǔ)腎陽（即右歸丸之溫腎陽中藥復(fù)方）治療組進(jìn)行臨床觀察:
　　①主要臨床癥狀及舌象脈象觀察:60例腎陽虛證的主要臨床癥狀依次是:畏寒55例（占91.7％）、腰部酸痛51例（占85％）、腿膝酸軟48例（占80％）、疲倦乏力42例（占70％）、脫發(fā)36例（占60％）

15、、下肢水腫22例（占36.7％）、性欲減退21例（占35％）、手足冷17例（占28.3％）、夜尿多16例（占26.7％），另外還有牙齒松動、記憶力減退等癥狀，出現(xiàn)頻率較少見。
　?、趦山M臨床療效比較:經(jīng)秩和檢驗分析，Z=-2.062，P=0.039＜0.05，兩組療效差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，提示右歸丸組療效優(yōu)于右歸丸之溫腎陽對照組，結(jié)果表明，治療前兩組間比較無統(tǒng)計學(xué)差異，治療后組內(nèi)比較配對t檢驗發(fā)現(xiàn)兩組治療前后癥狀積分的差異均有統(tǒng)計學(xué)

16、意義(P＜0.01)，治療組與對照組的干預(yù)后癥狀積分比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（F=84.257，P＜0.01），說明治療組在改善腎陽虛證癥狀方面優(yōu)于對照組。
　　3.免疫功能測試:
　?、倭馨图?xì)胞轉(zhuǎn)化實驗顯示:左歸丸三組治療前后T淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗的刺激指數(shù)實驗顯示，治療前左歸丸組及左歸丸中滋腎陰治療組SI均下降，與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)。
　　②NK細(xì)胞活性測定:左歸丸三組治療前后NK細(xì)胞活性測定顯示，治療

17、前左歸丸組及左歸丸中滋腎陰治療組NK細(xì)胞活性％均下降，與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05）。治療后左歸丸治療組與正常組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義，而左歸丸之滋腎陰組與正常組比較差異仍有統(tǒng)計學(xué)意義。說明治療后，NK細(xì)胞活性％較治療前上升明顯，與正常組相比無統(tǒng)計學(xué)差異，療效明顯優(yōu)越于左歸丸之滋腎陰治療組。
　　結(jié)論:
　　1.左歸丸組在臨床治療腎陰虛證方面優(yōu)于單純滋腎陰中藥復(fù)方對照組，提示“陽中求陰”法優(yōu)于單純滋陰治療。右歸丸組在