Caveolae和Caveolin-1對肺泡巨噬細(xì)胞上IL-1β-IFN-γ-MIP-2的影響.pdf

1、目的:
　　研究小窩(caveolae)正常結(jié)構(gòu)的維持及小窩蛋白-1（caveolin-1，cav-1）的表達(dá)對肺泡巨噬細(xì)胞分泌促炎因子IL-1β、IFN-γ及趨化因子MIP-2的影響，并探討CSD肽（caveolin-1 scaffolding domain peptide）對肺泡巨噬細(xì)胞IL-1β表達(dá)的調(diào)節(jié)。
　　方法:
　　支氣管肺泡灌洗分離提取Balb/c小鼠原代肺泡巨噬細(xì)胞(alveolarmacrophag

2、es，AM)，免疫熒光法和Western blot鑒定AM上cav-1的表達(dá)。FilipinⅢ(2.5μg/ml)處理RAW264.7細(xì)胞30min，ELISA測定培養(yǎng)液細(xì)胞因子IL-1β、IFN-γ及MIP-2的濃度。FilipinⅢ處理RAW264.7細(xì)胞30min后，再加LPS刺激6h，熒光實時定量PCR(Real-Time PCR)測定IL-1β mRNA的量，ELISA測定培養(yǎng)液細(xì)胞因子IL-1β、IFN-γ及MIP-2的濃度

3、。LPS(1μg/ml)處理AM及RAW264.7細(xì)胞6h，Western blot分析caveolin-1的表達(dá)。再用LPS處理RAW264.7細(xì)胞不同時間(0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h)，Western blot分析IL-1β的表達(dá)。不同濃度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L) CSD肽預(yù)處理AM6h后，用LPS處理4h; LPS處理RAW264.7細(xì)胞6h后，加CSD肽(5μmol/L)處理30h

4、，Westernblot檢測IL-1β的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　1.Balb/c小鼠AM上有cav-1的表達(dá)。
　　2.FilipinⅢ處理后RAW264.7細(xì)胞培養(yǎng)液細(xì)胞因子IL-1β、IFN-γ及MIP-2的濃度都升高。
　　3.LPS處理6h后，AM及RAW264.7細(xì)胞caveolin-1水平降低;且RAW264.7細(xì)胞IL-1β mRNA表達(dá)增高，釋放在培養(yǎng)液里的IL-1β、IFN-γ及MIP-2的蛋白

5、水平濃度也升高;FilipinⅢ聯(lián)合LPS處理會加強(qiáng)這些因子的表達(dá)。在LPS處理的時效實驗中，IL-1β在15min和2h升高最明顯。
　　4.CSD肽預(yù)處理時，以濃度依賴方式抑制LPS刺激RAW264.7細(xì)胞生成IL-1β;CSD后處理時促進(jìn)LPS刺激AM細(xì)胞生成IL-1β。
　　結(jié)論:
　　1.Caveolae和cav-1都參與調(diào)控炎癥的發(fā)展。
　　2.FilipinⅢ破壞巨噬細(xì)胞上caveolae的結(jié)構(gòu)及L