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1、目的:探討降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)對(duì)過(guò)氧化氫(H2O2)誘導(dǎo)的離體培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)損傷的保護(hù)作用,觀察caveolae/caveolin-1對(duì)CGRP保護(hù)作用的影響。
方法:0.1％FBS的培養(yǎng)基同步化細(xì)胞24h;分別用CGRP和H2O2孵育細(xì)胞,觀察CGRP對(duì)H2O2損傷細(xì)胞的保護(hù)作用;5mmol/Lβ-環(huán)糊精(β-cyclodextrin,β-CD)預(yù)孵育細(xì)胞30min破壞caveolae結(jié)構(gòu),觀
2、察caveolae對(duì)CGRP保護(hù)作用的影響;噻唑藍(lán)比色法(MTT)觀察HUVECs活力;Western-blot檢測(cè)caveolin-1表達(dá)。PI單染流式細(xì)胞術(shù)觀察HUVECs周期分布情況。
結(jié)果:①CGRP(1～100nmol/L)能濃度依賴性的提高HUVECs活力;H2O2(0.2～1.0mmol/L)則濃度依賴性的降低HUVECs活力;10、100nmol/L CGRP預(yù)孵育HUVECs30min能明顯提高氧化損傷HUV
3、ECs的活力(P﹤0.05)。②與0.1%FBS組比較,100nmol/L CGRP孵育細(xì)胞降低caveolin-1表達(dá)水平(P﹤0.05);0.5mmol/LH2O2則使細(xì)胞caveolin-1水平上升(P﹤0.05);100nmol/L CGRP預(yù)孵育HUVECs30min能顯著降低氧化損傷HUVECs caveolin-1表達(dá)水平(P﹤0.05)。③破壞caveolae結(jié)構(gòu)后,增強(qiáng)CGRP拮抗氧化損傷引起的HUVECs活力下降的效
4、應(yīng)(P<0.05),膽固醇能夠削弱這種增強(qiáng)效應(yīng)(P<0.05)。④破壞caveolae結(jié)構(gòu)增強(qiáng)CGRP下調(diào)HUVECs caveolin-1表達(dá)的作用(P<0.05);預(yù)加入膽固醇后,該作用被削弱。⑤與正常組比較,CGRP使HUVECs S期細(xì)胞數(shù)明顯增多,H2O2使HUVECs S期細(xì)胞數(shù)明顯減少;CGRP預(yù)孵育細(xì)胞,增加氧化損傷HUVECs S期細(xì)胞數(shù),提高氧化損傷HUVECs PI值;破壞caveolae結(jié)構(gòu)增強(qiáng)CGRP增多氧化損
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