牛體細(xì)胞克隆胚構(gòu)建方法研究.pdf

1、分類號(hào)Q343UDC密級(jí)編號(hào)1012630511011論文題目牛體細(xì)胞克隆胚構(gòu)建方法研究STUDYONBOVINESOMATICCELLNUCLEARTRANSFER研究生指導(dǎo)老師專業(yè)研究方向?qū)W院賈瑞貞李煌副教授動(dòng)物學(xué)動(dòng)物細(xì)胞工程生命科學(xué)學(xué)院零零八年五月你氣賈瑞貞牛體細(xì)胞克隆胚構(gòu)建方法研究牛體細(xì)胞克隆胚構(gòu)建方法研究摘任石3(本研究以牛的去透明帶體細(xì)胞核移植為主題，比較了牛卵母細(xì)胞的不同成熟培養(yǎng)方法分離并傳代培養(yǎng)了牛耳成纖維體細(xì)胞研究了牛

2、體細(xì)胞核移植過(guò)程的去核方法、融合條件等對(duì)重構(gòu)胚發(fā)育的影響，旨在探索一種簡(jiǎn)化的核移植操作程序。1.以抽吸法采集了屠宰母牛卵巢卵母細(xì)胞，并重點(diǎn)探討了添加不同種類及不同劑量激素的培養(yǎng)系統(tǒng)對(duì)牛卵母細(xì)胞成熟率的影響，即PMSG、HCG、FSH、LH對(duì)卵母細(xì)胞IVM的影響，在成熟培養(yǎng)液內(nèi)添加這幾類激素可以促進(jìn)卵母細(xì)胞的體外成熟，最高成熟率為81.7%。2.不同成熟培養(yǎng)時(shí)間對(duì)極體排出率和附著率的影響:成熟培養(yǎng)18一19h，20一Zlh，23一24h日

3、寸，極體排出率分別為76.1%，81.7%，82.2%。消化透明帶后，在成熟培養(yǎng)18一19h，20一Zlh，23一24h日寸，極體附著率分別為77.2%、64.1%，41.3%。結(jié)果表明，成熟培養(yǎng)20一Zlh后去除透明帶處理，其極體排出和附著效果最佳。3.去核效果的比較:采用半卵法和盲切法作對(duì)比，結(jié)果顯示半卵法去核率高于盲切法，借助熒光染色達(dá)到100%，但所用時(shí)間長(zhǎng)，去核效率不如盲切法高。4.融合條件的優(yōu)化:在脈沖寬度為40且S、2次脈