HMG、EGF、TGF-α對(duì)牛卵母細(xì)胞IVM及供體細(xì)胞對(duì)重構(gòu)胚的影響.pdf

1、利用卵母細(xì)胞體外成熟技術(shù)，可獲得大量的廉價(jià)卵母細(xì)胞，既克服了超數(shù)排卵技術(shù)的局限性，又滿足了胚胎工程技術(shù)發(fā)展的需要。本文以TCM199為基礎(chǔ)培養(yǎng)基探討了HMG、EGF、TGF-α在牛卵母細(xì)胞體外成熟(IVM)和發(fā)育中的作用；以確立牛卵母細(xì)胞IVM較好的培養(yǎng)體系，為體細(xì)胞核移植技術(shù)提供大量優(yōu)質(zhì)的卵母細(xì)胞。在此基礎(chǔ)上進(jìn)一步研究了供體細(xì)胞不同的處理方法對(duì)核移植重構(gòu)胚的影響。結(jié)果表明：(1)在牛卵母細(xì)胞IVM中添加0.2 IU/mL的HMG組卵母

2、細(xì)胞的成熟率和激活后的卵裂率顯著高于添加0.075 IU/mL、0.15 IU/mL、0.2 IU/mL、0.3 IU/mL HMG組；添加50 ng/mL EGF組成熟率和卵裂率高于對(duì)照組和添加30 ng/mL、40 ng/mL、60ng/mL組；添加15 ng/mLTGF-α組成熟率高于對(duì)照組和添加5 ng/mL、40 ng/mL組，激活后卵裂率添加15 ng/mL組顯著高于其他組。本試驗(yàn)中添加0.2 IU/mL HMG、50 ng

3、/mL EGF、15 ng/mL TGF-α在各實(shí)驗(yàn)組中效果最佳。同時(shí)試驗(yàn)顯示EGF和TGF-α對(duì)牛卵母細(xì)胞的IVM和激活后的卵裂沒有明顯的協(xié)同作用。(2)分別用冷凍保存的和新鮮的成纖維細(xì)胞作為核供體，所得重構(gòu)胚卵裂率、囊胚率無顯著差異；供體細(xì)胞離心800 r/min時(shí)所得重構(gòu)胚效果較好，離心1500 r/min所得重構(gòu)胚的卵裂率、囊胚率與其他三組相比較低；血清饑餓3～5d組所得重構(gòu)胚比其他三組好；用解凍復(fù)蘇后再傳2代、5代的細(xì)胞進(jìn)行核