脂肪干細(xì)胞在構(gòu)建組織工程膀胱中的應(yīng)用.pdf

1、目的：探討脂肪干細(xì)胞（Adipose-derived stem cells，ADSCs）向膀胱平滑肌細(xì)胞（Smooth muscle cells，SMCs）和尿路上皮細(xì)胞（Urothelial epithelium cells，UCs）誘導(dǎo)分化的能力，同時(shí)初步探索制備適合工程膀胱細(xì)胞生長的支架材料。
　　方法：采用膠原酶Ⅰ消化大鼠腹股溝處脂肪，提取ADSCs，培養(yǎng)3-5代，開始誘導(dǎo)分化。實(shí)驗(yàn)組A：ADSCs+SMCs培養(yǎng)基+BB型

2、血小板源性生長因子（PDGF-BB）+轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）；實(shí)驗(yàn)組B：ADSCs+UCs培養(yǎng)基+表皮生長因子（EGF）；對(duì)照組為ADSCs。通過免疫熒光、Western Blot和逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈?zhǔn)剑≧T-PCR）評(píng)價(jià)脂肪干細(xì)胞的誘導(dǎo)水平。另外取生物材料:聚乳酸羥基乙酸（PLGA）、殼聚糖和海藻酸鈉通過雙乳法制備 PLGA-殼聚糖（PLGA-CS）、PLGA-海藻酸鈉聚合物。
　　結(jié)果：大鼠脂肪干細(xì)胞原代接種24h后，

3、初呈短梭形或多角形，48h后分裂增殖速度加快，體積變大。融合至80％-90%，傳代比為1:3，取P3 ADSCs，進(jìn)行誘導(dǎo)分化。4周后，A組表達(dá)平滑肌細(xì)胞標(biāo)志物（Desmin、Myosin），B組表達(dá)尿路上皮細(xì)胞標(biāo)志物（UP-Ia、CK-13）。雙乳法制備的PLGA-CS聚合物場(chǎng)發(fā)射掃描電鏡觀察納米粒的顆粒直徑為（272.93±5.22）nm，電勢(shì)為（29.37±0.92）mV；PLGA-海藻酸鈉納米粒的顆粒直徑為（190.27±3.5