納米金在單堿基突變檢測中的應(yīng)用.pdf

1、人類的許多遺傳性疾病都是由于基因的變異引起的，其中尤以單堿基的突變，即單堿基多態(tài)性最為普遍，實(shí)現(xiàn)對這些基因單堿基突變的早期、準(zhǔn)確、簡便、快速的確認(rèn)，對于人類相關(guān)疾病的發(fā)病機(jī)理研究及早期治療具有非常重要的意義。本研究論文發(fā)展了一系列新的基因單堿基突變檢測技術(shù)，實(shí)現(xiàn)了對目標(biāo)物的高靈敏測定。
　　將鏈置換的高度特異性與納米金凝聚變色的光學(xué)特性相結(jié)合，設(shè)計(jì)了一種新型的單堿基突變比色檢測方法。該法直接采用納米金作為比色報(bào)告基團(tuán)，以兩個(gè)末端均

2、帶有巰基的雙鏈DNA為特異捕獲探針，利用互補(bǔ)序列和單堿基突變序列對雙鏈探針置換能力的差異，實(shí)現(xiàn)了對單堿基突變的檢測。該檢測方法直觀、快速、簡便、成本低，pmol級的樣品無需儀器就可以觀察到顏色的變化。
　　雙鏈DNA和單鏈DNA具有不同的靜電性質(zhì)，所以雙鏈DNA和單鏈DNA對納米金有不同的吸附力。而納米金是一種理想的熒光淬滅劑，基于納米金的熒光淬滅特性，將納米金作為淬滅劑，我們設(shè)計(jì)了一種新型的熒光雙鏈探針，并將其應(yīng)用于DNA檢測。

3、雙鏈探針由相互互補(bǔ)，但長短不同的兩條寡核苷酸鏈組成，長鏈DNA與靶DNA完全互補(bǔ)（作為捕獲探針），在短鏈DNA的3’端標(biāo)記熒光基團(tuán)（作為信號探針），將這兩種單鏈 DNA雜交，即為熒光雙鏈探針。當(dāng)溶液中無靶DNA時(shí)，由于熒光雙鏈DNA不會吸附在納米金表面，所以就不會導(dǎo)致熒光淬滅。而當(dāng)溶液中存在靶DNA時(shí)，信號探針將會被置換，此時(shí)信號探針將吸附在納米金表面，導(dǎo)致熒光淬滅。該法簡便易行，能快速對靶DNA進(jìn)行檢測，而且能區(qū)分單個(gè)堿基的突變。

4、r>　　將磁珠的分離富集特性、連接酶的單堿基識別特異性和納米金凝聚變色的優(yōu)異光學(xué)特異性相結(jié)合，設(shè)計(jì)了一種新型的比色檢測單堿基突變的方法。該法采用納米金和磁珠分別標(biāo)記兩條不同的DNA鏈，當(dāng)兩條標(biāo)記DNA鏈和目標(biāo)鏈完全互補(bǔ)時(shí)，DNA連接酶催化這兩條鏈結(jié)合，從而使得納米金聚集在磁珠表面上，加入納米金放大子后，金納米粒子將被枝狀組裝在磁珠表面，從而放大檢測信號。而當(dāng)目標(biāo)鏈含有一個(gè)堿基突變時(shí)，連接酶不能催化這兩條鏈結(jié)合，經(jīng)磁場分離和熱變性后納米金