脫氧膽酸鈉(SD)在脂肪細(xì)胞溶脂和微血管內(nèi)皮細(xì)胞(MECs)凋亡方面的研究.pdf

1、目的:驗(yàn)證脫氧膽酸鈉(SD)對(duì)脂肪細(xì)胞的溶解作用，研究脫氧膽酸鈉(SD)在微血管內(nèi)皮細(xì)胞凋亡中的影響，為減少SD溶脂過程中對(duì)血管的損傷提供理論依據(jù)，增加SD溶脂的安全性。
　　方法:1、觀察SD對(duì)脂肪細(xì)胞損傷作用;檢測(cè)方法:CCK-8、乳酸脫氫酶檢測(cè)。2、觀察SD對(duì)HDMECs的損傷作用并研究以Caspase-3激活為主的凋亡途徑在這一損傷中的影響;檢測(cè)方法:CCK-8、Western Blot、Real-time PCR、Ann

2、exinⅤ/PI雙染。3、研究凋亡在SD損傷脂肪細(xì)胞中的影響;檢測(cè)方法:Hoechst染色、WesternBlot、CCK-8。4、觀察運(yùn)用Z-DEVD-FMK（Caspase-3抑制劑）后SD對(duì)HDMECs損傷程度及凋亡作用方面的變化;檢測(cè)方法:CCK-8、Western Blot、AnnexinⅤ/PI雙染。
　　結(jié)果:1、不同濃度的SD作用后均可引起人成熟脂肪細(xì)胞存活率降低，使脂肪細(xì)胞膜受損，細(xì)胞數(shù)量減少。2、不同濃度的SD

3、可使HDMECs存活率下降;0.15 mg/mL的SD作用于HDMECs4、8、12h后，Western Blot檢測(cè)Bax表達(dá)、Caspase-3及PARP活化增加;除4h外，藥物作用8、12h時(shí)，Caspase-9活化比對(duì)照組最著增高;Bcl-2無明顯變化;各時(shí)間點(diǎn)Caspase-8活化不顯著;加入Z-DEVD-FMK后Caspase-3及PARP活化均減少;Real-time PCR檢測(cè)SD作用下HDMECs后Bax mRNA表達(dá)

4、稍增加，Bcl-2 mRNA表達(dá)無明顯改變;AnnexinⅤ/PI雙染流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)低濃度SD作用于HDMECs后細(xì)胞早期凋亡稍增加，高濃度時(shí)壞死或晚期凋亡的細(xì)胞比例相對(duì)較大。3、SD作用于脂肪細(xì)胞后Hoechst染色未見明顯細(xì)胞凋亡;WesternBlot檢測(cè)Caspase-3無明顯活化;加入Z-DEVD-FMK并未使脂肪細(xì)胞存活增加。4、SD聯(lián)合Z-DEVD-FMK可減少SD對(duì)HDMECs的損傷，使Caspase-3和PARP活