TGF-β1、MMP-9基因多態(tài)性與慢性乙肝易感性的相關(guān)研究.pdf

1、目的：乙型肝炎是威脅人類健康的一種重要疾病，乙肝病毒(HBV)的感染在世界范圍內(nèi)很廣泛。目前我國(guó)乙型肝炎的發(fā)病率居傳染病首位，死亡數(shù)居傳染病第三位，危害很嚴(yán)重。不同個(gè)體在感染HBV后臨床表現(xiàn)及結(jié)局各不相同。近來的研究顯示乙肝感染具有遺傳易感特征，HBV感染的預(yù)后與個(gè)體基因的多態(tài)性有關(guān)。單核苷酸多態(tài)性 (singlenucleotide polvnaorphism，SNP) 是基因多態(tài)性研究的第三代標(biāo)記，正逐步成為分子診斷、臨床檢驗(yàn)、新藥

2、研發(fā)的重要手段。通過檢測(cè)基因的SNPs發(fā)現(xiàn)新的基因突變情況及基因多態(tài)性與人類疾病的相關(guān)性，能為進(jìn)一步了解疾病發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)理提供依據(jù)。因此，系統(tǒng)地研究個(gè)體基因的多態(tài)性與慢性乙型肝炎的相關(guān)性，對(duì)于慢性乙型肝炎的預(yù)測(cè)、預(yù)防及治療將會(huì)起到重要作用。TGF-β基因和MMP基因是目前研究的熱點(diǎn)。本課題通過檢測(cè)慢性乙型肝炎患者和正常人群中TGF-β1基因啟動(dòng)子區(qū)-509C/T基因多態(tài)性和MMP-9啟動(dòng)子區(qū)-1562C/T基因多態(tài)性的分布頻率，分析

3、此兩個(gè)功能性基因多態(tài)性與慢性乙型肝炎的相關(guān)性，探討它們?cè)诼砸倚透窝装l(fā)生和發(fā)展中所起的作用，以便從更深入的基因水平尋找慢性乙型肝炎的遺傳根源，為其預(yù)防和治療提供相應(yīng)的指導(dǎo)，最大限度地預(yù)防這些疾病的發(fā)生和發(fā)展。 方法：按照2000年全國(guó)第十次病毒性肝炎及肝病學(xué)術(shù)會(huì)議修訂的《病毒性肝炎防治方案》的診斷標(biāo)準(zhǔn)，選取河北省石家莊市傳染病醫(yī)院的慢性乙肝患者75例作為病例組(包括48例慢性肝炎患者和27例肝炎后肝硬化患者)、92名健康體檢人員

4、作為正常對(duì)照組；取研究對(duì)象外周靜脈血5ml，用胍鹽酸法提取血細(xì)胞中的人類基因組DNA，并用紫外分光光度計(jì)檢測(cè)DNA的濃度和純度。應(yīng)用等位基因特異擴(kuò)增方法 (ASA) 設(shè)計(jì)兩對(duì)TGF-β1基因啟動(dòng)子區(qū)-509C/T 位點(diǎn)的特異引物(分別擴(kuò)增野生型等位基因和突變型等位基因)，模板DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1％瓊脂糖凝膠電泳分離，對(duì)個(gè)體基因型及等位基因型進(jìn)行判定。在基因分型時(shí)做空白對(duì)照進(jìn)行PCR質(zhì)量控制；隨機(jī)抽取10％樣本，重復(fù)檢測(cè)其基

5、因多態(tài)性。 設(shè)計(jì) MMP-9 啟動(dòng)子區(qū)-1562C/T 位點(diǎn)的引物，模板DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后，得到的PCR產(chǎn)物用Sph Ⅰ酶切，酶切產(chǎn)物經(jīng) 1.25％瓊脂糖凝膠電泳分離，檢測(cè)個(gè)體基因型及等位基因型。 應(yīng)用SASV8.1軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±SD)表示；基因頻率采用基因計(jì)數(shù)法計(jì)算，組間基因型及等位基因頻率的比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果：病例組與對(duì)照組在年齡、性別

6、等基本特征比較無顯著性差異(P>0.05)，兩組具有較好的可比性。研究結(jié)果顯示TGF-β1基因啟動(dòng)子區(qū)-509位點(diǎn)出現(xiàn)C/T變異，健康對(duì)照組、病例組都以CT基因型為主，兩組比較，TGF-β1-509位點(diǎn)各基因型和等位基因的分布頻率并無顯著性差異fP>0.05)。肝炎后肝硬化組CC基因型頻率(37.04％)高于TT基因型頻率(18.52％)，肝炎后肝硬化組 CC 基因型頻率(37.04％)顯著高于慢性肝炎組(10.42％)，兩組比較差異有

7、顯著性(P<0.05)。肝炎后肝硬化組C等位基因頻率(59.26％)高于慢性肝炎組(40.74％)，兩組比較差異尚無顯著性(P>0.05)。慢性肝炎組慢輕肝、慢中肝、慢重肝三組比較TGF-β1-509位點(diǎn)各基因型和等位基因的分布頻率無顯著性差異(P>0.05)。肝炎后肝硬化組活動(dòng)性肝硬化和靜止性肝硬化兩組比較TGF-β1-509位點(diǎn)各基因型和等位基因的分布頻率無顯著性差異(P>0.05)。研究結(jié)果顯示MMP-9基因啟動(dòng)子區(qū)-1562位點(diǎn)

8、出現(xiàn)C/T變異，本研究只檢測(cè)到CC基因型和CT基因型。病例組與健康對(duì)照組比較，MMP-9-1562位點(diǎn)各基因型和等位基因的分布頻率沒有顯著性差異(P>0.05)。慢性肝炎組與肝炎后肝硬化組比較MMP-9-1562位點(diǎn)各基因型和等位基因的分布頻率沒有顯著性差異(P>0.05)。慢性肝炎組慢輕肝、慢中肝、慢重肝三組比較MMP-9-1562位點(diǎn)各基因型和等位基因的分布頻率無顯著性差異(P>0.05)。肝炎后肝硬化組活動(dòng)性肝硬化和靜止性肝硬化兩

9、組比較MMP-9-1562位點(diǎn)各基因型和等位基因的分布頻率無顯著性差異(P>0.05)。研究中還發(fā)現(xiàn) MMP-9-1562 位點(diǎn) CT 基因型的慢性乙肝患者的HBeAg陽性構(gòu)成顯著高于CC基因型慢性乙肝患者，兩組比較差異有顯著性(P<0.05)。 結(jié)論：TGF-β1-509 CC基因型與慢性乙肝發(fā)展的嚴(yán)重程度有關(guān)，TGF-β1-509位點(diǎn)C等位基因可能是慢性乙肝發(fā)展的易感基因。 MMP-9-1562C/T基因多態(tài)性與慢性