2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
已閱讀1頁,還剩37頁未讀, 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、目的:在制備抗心肌Na/Ca交換體α-1(138-177)和α-2(840-877)兩種多克隆抗體的基礎上,分別觀察它們對大鼠心肌細胞Na+/Ca2+交換體、L型鈣通道、瞬時外向鉀通道和內(nèi)向整流鉀通道電流的影響。
   方法:
   1.抗體制備和純化:用化學合成的Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)和α-2(840-877)短肽對新西蘭大耳白兔進行主動免疫獲取抗血清,間接ELISA法檢測免疫后抗血清效價,用P

2、roteinA層析柱對抗體進行親和純化。
   2.膜片鉗全細胞記錄:應用膜片鉗全細胞記錄模式觀察抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)和α-2(840-877)兩種多克隆抗體分別對心肌細胞Na+/Ca2+交換電流、L型鈣電流、瞬時外向鉀電流和內(nèi)向整流鉀電流的影響。
   3.采用EMBOSS Pairwise Alignment Algorithms軟件對Na+/Ca2+交換體α-l(138-177)、α

3、-2(840-877)短肽序列分別與L型鈣通道孔環(huán)的氨基酸序列進行了比對。
   結(jié)果:
   1.抗體效價、濃度及純化結(jié)果:間接ELISA法檢測結(jié)果表明,在第三次加強免疫后,抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)和α-2(840-877)抗血清效價均高達1:243000。抗血清經(jīng)ProteinA純化后發(fā)現(xiàn),抗α-1(138-177)和α-2(840-877)抗體濃度分別為13.1mg/ml和7.21mg/

4、ml。SDS-PAGE檢測顯示,純化后的兩種抗體在電泳時分別出現(xiàn)清晰的2條帶,其分子量分別為25和50kD左右。
   2.抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)和α-2(840-877)兩種多克隆抗體對成年大鼠心肌細胞Na+/Ca2+交換電流及其他離子通道電流的影響:膜片鉗全細胞記錄結(jié)果表明,在1-104nmol/L濃度范圍內(nèi),抗α-1(138-177)和抗α-2(840-877)兩種多克隆抗體對大鼠心肌細胞外向

5、和內(nèi)向Na+/Ca2+交換電流均表現(xiàn)出劑量依賴性的抑制作用。對兩種多克隆抗體作用選擇性的研究發(fā)現(xiàn),102-104nmol/L的抗α-1抗體,104nmol/L的抗α-2抗體對L型鈣電流也具有抑制作用。兩種抗體在1-104nmol/L濃度范圍內(nèi)對瞬時外向鉀電流和內(nèi)向整流鉀電流均無明顯作用。
   3.Na+/Ca2+交換體α-l(138-177)、α-2(840-877)短肽序列分別與L型鈣通道氨基酸序列的相似性比較:氨基酸序列比

6、對表明,Na+/Ca2+交換體α-l(138-177)重復序列與L型鈣通道第4結(jié)構(gòu)域孔環(huán)(1442-1483位氨基酸)序列的相似度為27.7%;Na+/Ca2+交換α-2(840-877)短肽序列與L型鈣通道第2結(jié)構(gòu)域孔環(huán)(697-730位氨基酸)序列的相似度為23.7%。
   結(jié)論:
   1.本研究采用主動免疫和親和純化的方法,制備并獲得了高濃度和高純度的抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)和α-2

7、(840-877)兩種多克隆抗體,為對其進行進一步的功能研究奠定了基礎。
   2.在低濃度(抗α-1抗體濃度≤10nmol/L,抗α-2抗體濃度≤103nmol/L)條件下,抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)和α-2(840-877)抗體均可特異性地抑制大鼠心肌Na+/Ca2+交換體。
   3.在高濃度(102-104 nmol/L的抗α-1抗體,抗α-2抗體濃度104nmol/L)時,抗心肌Na+

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評論

0/150

提交評論