親和純化抗Na+-Ca2+交換體α-1(138-177)抗體對(duì)大鼠離體心功能及心肌細(xì)胞離子通道電流的影響.pdf

1、目的：
　　 觀(guān)察1-103nmol/LProtein A純化抗鈉-鈣交換體(NCX)α-1(138-177)肽段抗體對(duì)離體大鼠心功能的影響；在使用抗原親和純化方法進(jìn)一步純化抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)抗體的基礎(chǔ)上，分別觀(guān)察其對(duì)大鼠心肌細(xì)胞Na+/Ca2+交換體、L-型鈣通道、內(nèi)向整流鐘通道和瞬時(shí)外向鉀通道電流的影響。
　　 方法：
　　 1.離體心臟灌流：用Protein A純化抗Na+

2、/Ca2+交換體α-1(138-177)抗體灌流正常大鼠離體心臟，利用Langendorff離體灌流系統(tǒng)觀(guān)察其對(duì)正常大鼠離體心功能的影響，觀(guān)測(cè)指標(biāo)包括左室發(fā)展壓(LVSP-LVDP)、左室最大上升速率（+dP/dtmax）和左室最大下降速率（-dP/dtmax）。同時(shí)觀(guān)察NCX特異性阻斷劑KB-R7943對(duì)大鼠心功能的作用。
　　 2.抗體的抗原親和純化：利用抗原親和純化柱對(duì)多肽抗體進(jìn)行親和純化，并對(duì)純化后的抗體進(jìn)行ELISA檢

3、測(cè)，確定抗體效價(jià)。
　　 3.膜片鉗全細(xì)胞記錄：應(yīng)用膜片鉗全細(xì)胞記錄模式觀(guān)察抗原親和純化后的抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)抗體對(duì)心肌細(xì)胞Na+/Ca2+交換電流、L-型鈣電流、內(nèi)向整流鉀電流和瞬時(shí)外向鉀電流的影響。
　　 結(jié)果：
　　 1.Protein A純化抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)抗體對(duì)正常大鼠離體心功能的影響：與對(duì)照組相比，1-10nmol/Lα-1抗體可使

4、正常大鼠離體心臟左室發(fā)展壓(LVSP-LVDP)和左室壓最大上升速率(+dP/dtmax)明顯增加（P＜0.01）（表1，圖1.1，1.2，1.3，1.4），并使左室壓最大下降速率(-dP/dtmax)減小(P＜0.01)（表1，圖1.1，1.2，1.3，1.4），且KB-R7943(2μmol/L)可使α-1抗體(1nmol/L)的上述效應(yīng)進(jìn)一步增強(qiáng)。然而，102-103nmol/Lα-1抗體則可使大鼠離體心臟LVSP-LVDP、±d

5、P/dtmax呈不同程度地下降（P＜0.01）（表1，圖2.1，1.2，1.3，1.4）。
　　 2.抗體效價(jià)、濃度及純化結(jié)果：?jiǎn)柦覧LISA法檢測(cè)結(jié)果顯示，經(jīng)抗原親和純化柱親和純化后，抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)抗血清效價(jià)為1∶32000，抗體濃度為0.5mg/ml（表2.1）。
　　 3.抗原親和純化后抗心肌Na+/Ca2+交換體α-1(138-177)抗體對(duì)成年大鼠心室肌細(xì)胞Na+/Ca2+

6、交換電流及其他離子通道電流的影響：全細(xì)胞膜片鉗記錄結(jié)果表明，在0.1-102μg/mL濃度范圍內(nèi)，抗α-1(138-177)抗體對(duì)大鼠心肌細(xì)胞外向及內(nèi)向Na+/Ca2+交換電流均呈現(xiàn)出劑量依賴(lài)性地抑制作用（表2.2，圖2.1）。對(duì)該抗體的進(jìn)一步研究表明，0.1-10μg/mL的該抗體對(duì)L-型鈣電流沒(méi)有作用，而102μg/mL的抗α-1抗體對(duì)L-型鈣電流也具有抑制作用（表2.3，圖2.2）。該抗體在0.1-102μg/mL濃度范圍內(nèi)對(duì)內(nèi)向

7、整流鉀電流和瞬時(shí)外向鉀電流均未見(jiàn)明顯作用（圖2.3、2.4）。
　　 結(jié)論：
　　 1.低濃度Protein A純化α-1(138-177)(1-10nmol/L)抗體可明顯增強(qiáng)心肌收縮，高濃度Protein A純化α-1(138-177)(102-103nmol/L)抗體對(duì)心肌的收縮和舒張均有抑制作用。
　　 2.抗α-1(138-177)抗體經(jīng)抗原親和純化后，獲得了濃度和純度都較高的抗心肌Na+/Ca2+交換