小干擾RNA降低環(huán)氧化酶-2基因表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞系HepG2增殖影響.pdf

1、原發(fā)性肝癌(primary hepatic carcinoma，PHC)是全球最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，近年來(lái)一些研究發(fā)現(xiàn)環(huán)氧化酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)在原發(fā)性肝癌表達(dá)增高，推測(cè)其可能參與了PHC的發(fā)生及進(jìn)展。本課題通過(guò)小干擾RNA(siRNA)降低COX-2基因表達(dá)，觀察其對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的影響，并探討其作用的可能機(jī)制，旨在為治療肝癌的新手段提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 目的：探討小干擾RNA降低環(huán)氧化酶-

2、2基因表達(dá)對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖與細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白激酶(ERK)表達(dá)的影響 方法：以HepG2細(xì)胞為研究對(duì)象，實(shí)驗(yàn)分成四組：COX-2 siRNA干預(yù)組、對(duì)照siRNA組、空脂質(zhì)體組和空白組。MTT法測(cè)定各組細(xì)胞24h、48h、72h的增殖抑制率；流式細(xì)胞儀測(cè)定各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后細(xì)胞周期；半定量RT-PCR檢測(cè)各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后COX-2、ERKI/2mRNA的表達(dá)；蛋白免疫印跡法(western blotting)測(cè)定

3、各組細(xì)胞培養(yǎng)24h后COX-2、ERK1/2蛋白的表達(dá)。 結(jié)果：(1)MTT法結(jié)果顯示：COX-2siRNA干預(yù)組的增殖抑制率明顯高于陰性對(duì)照組、空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組(P<0.01)。陰性對(duì)照組與空脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染組之間的差異無(wú)顯著性(P>0.05)。COX-2siRNA干預(yù)組24h抑制率高于48h及72h。(2)流式細(xì)胞儀分析結(jié)果表明：COX-2siRNA干預(yù)組細(xì)胞G1期(DNA合成前期)細(xì)胞明顯增多，與空白組、空脂質(zhì)體組及陰性對(duì)照組相比

4、，均具有明顯差異(P<0.05)。(3)RT-PCR結(jié)果顯示：與空白組、空脂質(zhì)體組及陰性對(duì)照組比較，COX-2siRNA干預(yù)組的COX-2、ERK1/2 mRNA表達(dá)明顯降低，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。(4)westernblotting結(jié)果顯示：與空白組、空脂質(zhì)體組及陰性對(duì)照組比較，COX-2siRNA干預(yù)組的COX-2、ERK1/2蛋白表達(dá)明顯降低，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論：小干擾RNA可