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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:肝癌是最常見的惡性腫瘤之一,在我國(guó)屬于高發(fā)病,mTOR信號(hào)通路在許多腫瘤的發(fā)展中至關(guān)重要。AZD8055是新型mTOR激酶抑制劑,對(duì)mTOR活性具有很強(qiáng)的抑制作用。本文旨在研究AZD8055對(duì)人肝癌細(xì)胞系HepG2增殖和凋亡的作用,并初步探討其作用機(jī)制。
方法:
1、體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞株HepG2,采用MTT、流式細(xì)胞術(shù)及TUNEL染色檢測(cè)藥物作用不同時(shí)間對(duì)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期及細(xì)胞凋亡情況的影響,光學(xué)顯微鏡直接
2、觀察藥物處理24h后細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
2、采用免疫印跡實(shí)驗(yàn)(WB)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)PI3K/Akt/mTOR通路中S6K和Akt的磷酸化水平,采用Real-time PCR技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)侵襲相關(guān)的重要因子MMP2、MMP9的表達(dá)情況。
結(jié)果:
1、在體外細(xì)胞實(shí)驗(yàn)中,AZD8055(10nM)作用不同時(shí)間后,人肝癌細(xì)胞的增殖被顯著抑制,且抑制程度與作用時(shí)間呈正相關(guān)(P<0.05)。藥物處理24h后HepG2細(xì)胞密度
3、明顯降低,可見明顯的攣縮、凋亡。G0/G1期細(xì)胞周期阻滯并且細(xì)胞凋亡明顯增加。
2、藥物作用不同時(shí)間后,MMP2和MMP9的表達(dá)逐漸下調(diào),PI3K/Akt/mTOR通路中S6K和Akt的磷酸化水平降低,并且這種作用呈時(shí)間依賴性。
結(jié)論:
1、在體外,AZD8055可抑制人肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng),阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期并誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。
2、MMP2,MMP9與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移相關(guān),AZD8055可能通過(guò)降低
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