苦參素對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:
　　 觀察苦參素(oxymatrine,OM)對實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimentalallergic encephalomyelitis,EAE)大鼠的臨床表現(xiàn)、脊髓病理變化、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)炎癥浸潤細(xì)胞凋亡及凋亡相關(guān)蛋白NF-κBp65,Bcl-2,Bax的影響,分析苦參素在EAE防治中的作用及可能的機(jī)制,為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：<

2、br>　　 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組:將40只雌性wistar大鼠隨機(jī)分為4組:正常組、模型組、OM小劑量組(OM1,100mg·kg-1)、OM大劑量組(OM2,150mg·kg-1)。
　　 2、模型建立:應(yīng)用四肢足墊皮內(nèi)注射豚鼠全脊髓勻漿和完全弗氏佐劑制成的抗原乳劑,并輔以注射濃度為6.0×109個(gè)菌體/ml的百日咳疫苗0.1ml,誘導(dǎo)大鼠建立EAE模型。免疫后每日觀察實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的活動(dòng)情況,記錄發(fā)病動(dòng)物的體重變化、神經(jīng)功能評分、潛

3、伏期、發(fā)病率。
　　 3、給藥方式:正常組和模型組自免疫當(dāng)天起每天一次腹腔注射生理鹽水,連續(xù)注射18天；OM1組自免疫當(dāng)天起每天一次腹腔注射苦參素注射液(100mg·kg-1),連續(xù)給藥18天；OM2組自免疫當(dāng)天起每天一次腹腔注射苦參素注射液(150mg·kg-1),連續(xù)給藥18天。
　　 4、組織取材:在第18天大鼠心臟灌流,取脊髓腰膨大置于4％的多聚甲醛中固定,石蠟包埋,切片。
　　 5、指標(biāo)檢測:HE染色觀

4、察脊髓組織病理學(xué)改變,TUNEL法觀察炎癥浸潤細(xì)胞的凋亡情況,免疫組織化學(xué)方法觀察凋亡相關(guān)蛋白NF-κBp65,Bcl-2、Bax的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1、動(dòng)物潛伏期、發(fā)病率觀察:正常組無動(dòng)物發(fā)病,OM1組、OM2組發(fā)病潛伏期較模型組延遲,OM2組發(fā)病潛伏期較OM1組延遲。OM1組、OM2組動(dòng)物發(fā)病率低于模型組(P>0.05),OM2組動(dòng)物發(fā)病率低于OM1組發(fā)病率(P>0.05)。
　　 2、體重變化及神

5、經(jīng)功能評分變化:實(shí)驗(yàn)期間正常組動(dòng)物體重持續(xù)上升,OM1組、OM2組、模型組三組動(dòng)物平均體重整體呈下降趨勢,OM1組、OM2組、模型組平均體重變化與正常組相比P<0.05,OM1組、OM2組平均體重變化較模型組小(P<0.05),OM2組平均體重變化較OM1組小(P>0.05)。模型組動(dòng)物平均神經(jīng)功能評分高于OM1組和OM2組(P<0.05),OM2組動(dòng)物平均神經(jīng)功能評分低于OM1組(P>0.05)。
　　 3、組織病理學(xué)觀察:正

6、常組動(dòng)物脊髓內(nèi)無炎性細(xì)胞浸潤,模型組、OM1組、OM2組動(dòng)物脊髓內(nèi)均存在炎性細(xì)胞浸潤,OM1組、OM2組脊髓內(nèi)炎癥浸潤細(xì)胞比模型組少,OM2組炎癥浸潤細(xì)胞比OM1組少。
　　 4、CNS炎癥浸潤細(xì)胞凋亡陽性率比較:模型組、OM1組、OM2組細(xì)胞凋亡陽性率均高于正常組(P<0.05),OM1組、OM2組細(xì)胞凋亡陽性率高于模型組(P<0.05),OM2組高于OM1組(P<0.05)。
　　 5、NF-κBp65、Bcl-2、

7、Bax表達(dá):OM1組、OM2組NF-κBp65、Bcl-2表達(dá)低于模型組(P<0.05),且OM2組低于OM1組(P<0.05)；OM1組、OM2組、模型組Bax表達(dá)相差不大(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 苦參素對大鼠實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎具有明顯的防治作用,其作用機(jī)制可能是通過抑制中樞神經(jīng)系統(tǒng)細(xì)胞NF-κBp65、Bcl-2的表達(dá),重新調(diào)整Bcl-2、Bax之間的平衡,增加CNS炎癥浸潤細(xì)胞的凋亡,減少CNS