ASD導(dǎo)管封堵前后細(xì)胞因子與NF-kB-JNK信號(hào)通路關(guān)系探索.pdf

1、目的：
　　探索使用導(dǎo)管封堵術(shù)治療先天性心臟病房間隔缺損（ASD）前后，患者體內(nèi)細(xì)胞因子的變化及其可能機(jī)制，并通過動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探索引起這種變化的分子機(jī)制。
　　方法：
　　本文回顧性分析了2013年9月至2015年12月間在我院接受治療200例先天性心臟病房間隔缺損（ASD）患者病例，作為研究組，所有患者均采用導(dǎo)管封堵術(shù)進(jìn)行治療，在治療前、治療6個(gè)月之后和治療12個(gè)月之后對(duì)患者進(jìn)行體檢，提取患者血清，采用酶聯(lián)免疫吸附

2、的方法測(cè)定血清中TNF-α，IL-6，IL-8， IL-10等細(xì)胞因子的含量；另外選取200例正常健康體檢人群作為對(duì)照組，檢測(cè)其血清中細(xì)胞因子的含量。
　　在研究組和對(duì)照組中各隨機(jī)選取100例樣本，對(duì)外周血單核細(xì)胞樣本采用免疫細(xì)胞化學(xué)染色，免疫印跡分析檢測(cè)，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)等實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行檢測(cè)，探索引起患者體內(nèi)細(xì)胞因子上升的分子機(jī)制。
　　采用Hybrid方法建立先天性心臟病的幼豬動(dòng)物模型，成功構(gòu)建40個(gè)先天性心臟病幼豬

3、模型，將40只構(gòu)建成功的幼豬隨機(jī)分為A、B、C、D四組，每組10只幼豬。并保留10只正常幼豬測(cè)定血清細(xì)胞因子水平作為空白對(duì)照組。A組在模型構(gòu)建手術(shù)后采用導(dǎo)管封堵術(shù)進(jìn)行治療并在6個(gè)月內(nèi)連續(xù)注射生理鹽水作為對(duì)照組，B組在模型構(gòu)建手術(shù)后6個(gè)月內(nèi)連續(xù)注射PDTC（NF-kb抑制劑），C組在模型構(gòu)建手術(shù)后6個(gè)月內(nèi)連續(xù)注射SP600125(JNK抑制劑），D組在模型構(gòu)建手術(shù)后6個(gè)月內(nèi)連續(xù)注射PDTC（NF-kb抑制劑）和SP600125(JNK抑制

4、劑），術(shù)前和術(shù)后6個(gè)月后測(cè)定幼豬體內(nèi)細(xì)胞因子的變化，探究導(dǎo)管封堵術(shù)治療先天性心臟病前后患者體內(nèi)細(xì)胞因子變化的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　本文研究結(jié)果顯示，2013年9月至2015年12月間在我院接受治療的研究組200例先心病ASD患者術(shù)前較對(duì)照組血清中炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-6，IL-8含量均有顯著的上升，而抗炎細(xì)胞因子 IL-10有顯著的降低；采用導(dǎo)管封堵術(shù)治療6個(gè)月之后研究組患者血清中炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-

5、6，IL-8較術(shù)前有顯著的降低，而抗炎細(xì)胞因子IL-10較術(shù)前有一定的上升；治療12個(gè)月之后血清中細(xì)胞因子TNF-α，IL-6，IL-8，IL-10恢復(fù)到正常水平。
　　研究組患者術(shù)前較對(duì)照組外周血單核細(xì)胞樣本中 NF-KB信號(hào)通路和 JNK信號(hào)通路有顯著的激活，術(shù)后研究組外周血單個(gè)核細(xì)胞樣本中NF-KB信號(hào)通路和JNK信號(hào)通路較對(duì)照組沒有明顯的激活。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR檢測(cè)結(jié)果顯示研究組術(shù)前炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-6，IL

6、-8的mRNA水平有顯著的上升，抗炎細(xì)胞因子IL-10的mRNA水平有顯著的降低；術(shù)后細(xì)胞因子TNF-α，IL-6， IL-8，IL-10的 mRNA水平恢復(fù)至正常水平。免疫組織化學(xué)染色結(jié)果顯示：研究組患者術(shù)前較對(duì)照組外周血單個(gè)核細(xì)胞樣本中 NK-kB的細(xì)胞核染色陽性率更高，術(shù)后與對(duì)照組無明顯差別；研究組患者術(shù)前較對(duì)照組外周血單核細(xì)胞樣本中 p-c-Jun的染色陽性率更高，術(shù)后研究組較對(duì)照組外周血單核細(xì)胞樣本中p-c-Jun的染色陽性率

7、無明顯差別。免疫印跡分析檢測(cè)結(jié)果顯示，研究組患者術(shù)前較對(duì)照組外周血單核細(xì)胞樣本中 p-c-Jun、p-IkBa、p-P65的蛋白水平均有顯著的上升，而術(shù)后研究組較對(duì)照組外周血單核細(xì)胞樣本中p-c-Jun、p-IkBa、p-P65的蛋白水平無明顯差別。
　　采用Hybrid方法建立先天性心臟病ASD的幼豬動(dòng)物模型，成功構(gòu)建40個(gè)先天性心臟病ASD幼豬模型，將40只構(gòu)建成功的幼豬分為A、B、C、D四組。四組幼豬在先心病模型構(gòu)建后均有炎

8、性細(xì)胞因子TNF-α，IL-6，IL-8含量上升，抗炎細(xì)胞因子 IL-10水平下降的癥狀。導(dǎo)管封堵術(shù)治療組在導(dǎo)管封堵術(shù)治療后基本回復(fù)至正常水平；PDTC注射組炎性細(xì)胞因子 TNF-α，IL-6，IL-8，IL-10的水平較正常水平有一定的上升；SP600125注射組炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-6， IL-8，IL-10的水平較正常水平也有一定的上升；PDTC與SP600125聯(lián)合注射組的炎性細(xì)胞因子TNF-α，IL-6，IL-8，IL

9、-10的水平與正常水平相比無明顯差別。
　　結(jié)論：
　　我們的研究結(jié)果顯示：先天性心臟病 ASD患者體內(nèi)有一定程度的免疫激活，造成患者體內(nèi)炎性細(xì)胞因子水平上升，抗炎細(xì)胞因子水平下降，產(chǎn)生一定的炎癥現(xiàn)象；經(jīng)過導(dǎo)管封堵術(shù)治療后，患者體內(nèi)的免疫系統(tǒng)逐漸恢復(fù)。引發(fā)先天性心臟病ASD患者體內(nèi)細(xì)胞因子變化的可能是通過NF-kB信號(hào)通路和JNK信號(hào)通路的協(xié)同作用下實(shí)現(xiàn)的，單獨(dú)一條信號(hào)通路可能無法實(shí)現(xiàn)對(duì)于先心病患者體內(nèi)細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)。我們的