耐伊曲康唑克柔念珠菌ERG11基因突變分析.pdf

1、隨著廣譜抗生素、免疫抑制劑的廣泛應(yīng)用和介入療法、器官移植等的深入開(kāi)展,侵襲性真菌感染的發(fā)病率不斷增高,盡管白念珠菌仍是臨床最為常見(jiàn)的真菌,但非白念珠菌的分離率不斷升高,而抗真菌藥物的廣泛應(yīng)用則加速了菌株的耐藥進(jìn)程,非白念珠菌臨床分離株中耐藥株的比例明顯增加,非白念珠菌耐藥問(wèn)題逐漸引起人們的重視。從分子水平研究非白念珠菌對(duì)抗真菌藥尤其是唑類(lèi)藥物的耐藥機(jī)制是目前的熱點(diǎn)。
　　 ERG11是羊毛甾醇14a-去甲基化酶的編碼基因,14a

2、-去甲基化酶是念珠菌細(xì)胞膜麥角固醇合成途徑中的關(guān)鍵酶,對(duì)維持細(xì)胞膜的正常結(jié)構(gòu)和功能具有重要意義。唑類(lèi)抗真菌藥物分子可與14a-去甲基化酶分子結(jié)合,阻斷羊毛固醇去甲基化過(guò)程,影響麥角固醇合成。ERG11的突變可以改變14a-去甲基化酶的氨基酸序列,當(dāng)這種改變足以影響酶分子的空間構(gòu)型時(shí),酶分子與藥物分子間的親和力可能被削弱,導(dǎo)致菌株耐藥。目前的研究主要針對(duì)白念珠菌,對(duì)于克柔念珠菌國(guó)內(nèi)外均未見(jiàn)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。
　　 目的:研究克柔念珠菌

3、臨床分離菌株麥角固醇合成途徑中關(guān)鍵酶編碼基因ERG11突變與耐唑類(lèi)藥物伊曲康唑之間的關(guān)系。
　　 方法:選擇2009年6月至2010年10月從本院臨床科室送檢標(biāo)本中分離得到的來(lái)自痰液、尿液、陰道分泌物的6株克柔念珠菌伊曲康唑耐藥株和3株敏感株,1株ATCC6258克柔念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株(購(gòu)自北大一院真菌中心),以抽提的克柔念珠菌基因組DNA為模板,對(duì)ERG11基因序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增,PCR產(chǎn)物直接DNA序列測(cè)定,最后應(yīng)用BLAST軟件

4、對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比較。
　　 結(jié)果:10株克柔念珠菌的ERG11基因序列(以已知序列第1個(gè)ATG起始密碼的A作為第1個(gè)記數(shù)單位)共有7個(gè)位點(diǎn)發(fā)生突變,均為同義突變位點(diǎn)。在第447bp位點(diǎn)耐藥菌株和敏感株均發(fā)生堿基突變。在第12bp、327bp、429bp、552bp位點(diǎn)耐藥菌株發(fā)生堿基突變,在第696bp、927bp位點(diǎn)敏感菌株發(fā)生堿基突變。
　　 結(jié)論:本研究證實(shí)克柔念珠菌ERG11基因序列存在多態(tài)性,未發(fā)現(xiàn)因ERG11