臨床假絲酵母菌藥敏分析及耐藥基因ERG11突變研究.pdf

1、目的:
　　 對(duì)引起假絲酵母菌感染的臨床菌株進(jìn)行分離鑒定,研究江西省假絲酵母菌臨床分離株的流行病學(xué)特點(diǎn),并監(jiān)測(cè)其對(duì)氟康唑藥物的耐藥性,為合理使用抗生素提供依據(jù)。
　　 方法:
　　 對(duì)2005-2008年收集的2681株假絲酵母菌臨床分離株,采用CHROMagar顯色培養(yǎng)基、Vitek2 YST鑒定條和假絲酵母菌基因快速診斷-多重PCR鑒定法進(jìn)行菌株鑒定,并按照美國(guó)國(guó)家臨床試驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化研究所(CLSI)推薦的《酵母

2、菌的液基稀釋法抗真菌藥物敏感試驗(yàn)參考方案第二版》(M27-A2)方案測(cè)定2681株假絲酵母菌對(duì)氟康唑藥物的敏感性。
　　 結(jié)果:
　　 2005-2008年共收集假絲酵母菌2681株,其中,白假絲酵母菌1903株,占71.0％；光滑假絲酵母菌486株,占18.1％:熱帶假絲酵母菌142株,占5.3％；克柔假絲酵母菌99株,占3.7％；其他菌種為51株,占1.9％。其中,1690(63.0％)株來(lái)源于痰液,623(23.2

3、％)株來(lái)自陰道,169(6.3％)株分離自尿液,102(3.8％)株來(lái)自大便,44(1.6％)株分離于血液,10(0.4％)株分離于腹水,其余43(1.6％)株來(lái)源其他部位。白假絲酵母菌在痰、陰道、大便、腹水、尿液和血液中所占的比例分別為:76.1％、68.2％、63.7％、60％、47.3％和31.8％；光滑假絲酵母菌在痰、陰道、大便、腹水、尿液和血液中所占的比例分別為:14.7％、19.7％、22.5％、40.0％、34.9％和40

4、.9％:熱帶假絲酵母菌在尿液中所占的比例為12.4％,而在痰、陰道、大便、血液中所占的比例不到7.0％。
　　 2681株假絲酵母菌中,氟康唑耐藥株為226株,耐藥率為8.4％；氟康唑劑量依賴敏感株109株,占4.1％；敏感株2346株,敏感率為87.4％。白假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌、熱帶假絲酵母菌和克柔假絲酵母菌的氟康唑耐藥率分別為4.5％(86/1903)、6.4％(31/468)、7.0％(10/142)和100％(99

5、/99)。不同部位的假絲酵母菌的氟康唑耐藥率也有所不同,其中來(lái)自陰道部位的假絲酵母菌氟康唑耐藥率最高,為13.5％(84)；其次為大便9.8％(10),尿液8.3％(14),其他部位7.0％(3),血液6.8％(3)和痰液6.6％(112)。
　　 結(jié)論:
　　 1、白假絲酵母菌仍然為臨床上最為常見和最主要的致病菌,其次為光滑假絲酵母菌。
　　 2、白假絲酵母菌主要常見于呼吸道、陰道和腸道的感染,而光滑假絲酵母菌

6、和熱帶假絲酵母菌主要見于無(wú)菌部位(血液和尿道)的感染?，F(xiàn)今假絲酵母菌的臨床感染譜已發(fā)生變化,其中非白假絲酵母菌引起的感染日趨增加,已成為血液和尿道真菌感染的主要因?yàn)椤?br>　　 3、假絲酵母菌江西臨床分離株對(duì)氟康唑總體耐藥率不高,血液與痰來(lái)源的假絲酵母菌對(duì)氟康唑的敏感性高,但是感染陰道部位的假絲酵母菌對(duì)氟康唑耐藥率高,達(dá)13.5％。
　　 4、氟康唑依然是一個(gè)有效的抗真菌藥物,但對(duì)克柔假絲酵母菌和陰道假絲酵母菌的感染應(yīng)謹(jǐn)慎選

7、擇合適的抗真菌藥物。
　　 目的:
　　 檢測(cè)白假絲酵母菌臨床分離株氟康唑靶酶編碼基因(ERG11)突變,探討其與耐藥性的關(guān)系。
　　 方法:
　　 以2005-2008年收集的白假絲酵母菌臨床分離株72株(氟康唑耐藥菌株49株,氟康唑劑量依賴敏感(S-DD)株16株和敏感菌株7株)為研究對(duì)象,PCR擴(kuò)增白假絲酵母菌ERG11全基因序列,DNA測(cè)序后經(jīng)生物信息學(xué)比對(duì)及分析ERG11基因的突變。
　　

8、 結(jié)果:
　　 經(jīng)DNA測(cè)序分析后,72株白假絲酵母菌ERG-11基因序列中共發(fā)現(xiàn)27個(gè)無(wú)義突變和14個(gè)錯(cuò)義突變,其中:(1)D225H、K342R、G450E和V488I這四個(gè)錯(cuò)義突變僅見于氟康唑耐藥菌株；(2)G129A僅見氟康唑劑量依賴敏感株中；(3)Y132H、A114S、Y257H、V437I、G465S、G448E和K128T這七個(gè)突變同時(shí)出現(xiàn)于耐藥株及劑量依賴敏感株中。
　　 此外發(fā)現(xiàn)在65株氟康唑耐藥株

9、和劑量依賴敏感株中存在7種多位點(diǎn)錯(cuò)義突變模式:(1)D116E、K128T、Y132H和G465S同時(shí)出現(xiàn)在2株耐藥株和3株S-DD株中；(2)A114S和Y257H同時(shí)出現(xiàn)在11株氟康唑耐藥株和3株S-DD株中,但不伴有其他位點(diǎn)的同義突變:(3)Y132H和G450E同時(shí)出現(xiàn)在2株氟康唑耐藥菌株中,但不伴有其他位點(diǎn)的同義突變；(4)Y132H和G448E同時(shí)出現(xiàn)在3株菌株中但不伴有其他位點(diǎn)的同義突變；(5)E266D和V488I同時(shí)出

10、現(xiàn)在3株耐藥株中；(6)D116E、E266D和V488I同時(shí)出現(xiàn)在2株耐藥菌株中；(7)D116E、E266D和V437I同時(shí)出現(xiàn)在2株耐藥菌株和1株S-DD株中。
　　 另外,我們也發(fā)現(xiàn)單突變模式比如V437I租K342R也存在于耐藥菌株中。
　　 結(jié)論:
　　 1.白假絲酵母菌敏感菌株和耐藥菌株ERG11基因的突變各不相同,多位點(diǎn)錯(cuò)義突變模式和單位點(diǎn)錯(cuò)義突變是導(dǎo)致耐藥的分子基礎(chǔ),多位點(diǎn)錯(cuò)義突變是劑量依賴敏感