黃瓜抗西瓜花葉病毒和番木瓜環(huán)斑病毒基因定位研究.pdf

1、病毒病是黃瓜上普遍發(fā)生和蔓延較快的一種世界性病害，病原種類繁多，難以防治。其中西瓜花葉病毒（Watermelon mosaic virus，WMV）和番木瓜環(huán)斑病毒(Papaya ring spot virus，PRSV)是引起該病的兩種主要病原。本研究以黃瓜感病毒?。╓MV和PRSV）高代自交系‘65G’和抗病毒?。╓MV和PRSV）高代自交系‘02245’為親本構(gòu)建F2群體及F2∶3家系，結(jié)合人工接種鑒定及ELISA檢測(cè)，對(duì)黃瓜WM

2、V和PRSV抗性進(jìn)行遺傳與定位分析，并對(duì)WMV相關(guān)候選基因進(jìn)行表達(dá)量分析。研究結(jié)果如下:
　　1、根據(jù)鑒定結(jié)果，對(duì)黃瓜WMV、PRSV抗性進(jìn)行遺傳分析，結(jié)果顯示，在F2群體中感病與抗病植株的分離比均符合3∶1，因此在本研究中黃瓜對(duì)WMV和PRSV抗性均是受一對(duì)隱性基因控制。
　　2、用1288對(duì)引物對(duì)P1(65G)和P2(02245)進(jìn)行多態(tài)性分析，從中篩選出296對(duì)在親本間多態(tài)性表現(xiàn)較好的引物，多態(tài)率為22.98％。經(jīng)分離

3、群體分組分析法(BSA)篩選，得到6對(duì)與WMV抗性基因連鎖標(biāo)記，10對(duì)與PRSV抗性基因連鎖標(biāo)記，構(gòu)建相應(yīng)的連鎖圖，結(jié)果顯示抗性位點(diǎn)wmv和prsv均被定位在黃瓜六號(hào)染色體上，wmv兩側(cè)翼標(biāo)記為SSR01566和UW016108，遺傳距離分別是6.4cM和3.9cM;prsv兩側(cè)翼標(biāo)記為SSR18405和SSR33284，遺傳距離分別為7.1cM和10.6cM。
　　3、對(duì)黃瓜PRSV抗性基因初定位區(qū)域進(jìn)行加密，最終將prsv位點(diǎn)

4、定位在標(biāo)記SSR11-177和SSR11-1之間，遺傳距離分別是1.1cM和2.9cM，物理距離為602.9kb。在35份材料中對(duì)SSR11-177進(jìn)行驗(yàn)證，驗(yàn)證準(zhǔn)確率為82.9％。
　　4、通過構(gòu)建F2大群體，對(duì)黃瓜WMV抗性基因進(jìn)行精細(xì)定位，最終將黃瓜WMV抗性基因定位在標(biāo)記CAPS-W1和SSRWMV60-23之間，其與wmv位點(diǎn)的連鎖距離分別為1.19cM和0.34cM，物理距離為134.7kb。并在70份遺傳背景不同的黃

5、瓜材料中，對(duì)標(biāo)記SSRWMV60-23準(zhǔn)確性進(jìn)行驗(yàn)證，準(zhǔn)確率為94.3％。
　　5、利用生物信息學(xué)技術(shù)對(duì)WMV定位區(qū)域進(jìn)行基因預(yù)測(cè)，結(jié)果表明在WMV定位區(qū)間內(nèi)共預(yù)測(cè)到21個(gè)基因，具有基因注釋的16個(gè)，其中4個(gè)與抗病相關(guān)。
　　6、分別采集P1、P2、F1接種WMV后0h、16h、40h、3.5d、5.5d、8d不同時(shí)間點(diǎn)的葉片，并設(shè)有相應(yīng)對(duì)照與重復(fù)，提取RNA，對(duì)上述4個(gè)WMV抗性的候選基因進(jìn)行熒光定量分析，結(jié)果顯示，在接種