黃瓜抗西瓜花葉病毒和番木瓜環(huán)斑病毒基因定位研究.pdf

1、病毒病是黃瓜上普遍發(fā)生和蔓延較快的一種世界性病害，病原種類繁多，難以防治。其中西瓜花葉病毒（Watermelon mosaic virus，WMV）和番木瓜環(huán)斑病毒(Papaya ring spot virus，PRSV)是引起該病的兩種主要病原。本研究以黃瓜感病毒?。╓MV和PRSV）高代自交系‘65G’和抗病毒病（WMV和PRSV）高代自交系‘02245’為親本構(gòu)建F2群體及F2∶3家系，結(jié)合人工接種鑒定及ELISA檢測，對黃瓜WM

2、V和PRSV抗性進行遺傳與定位分析，并對WMV相關(guān)候選基因進行表達量分析。研究結(jié)果如下:
　　1、根據(jù)鑒定結(jié)果，對黃瓜WMV、PRSV抗性進行遺傳分析，結(jié)果顯示，在F2群體中感病與抗病植株的分離比均符合3∶1，因此在本研究中黃瓜對WMV和PRSV抗性均是受一對隱性基因控制。
　　2、用1288對引物對P1(65G)和P2(02245)進行多態(tài)性分析，從中篩選出296對在親本間多態(tài)性表現(xiàn)較好的引物，多態(tài)率為22.98％。經(jīng)分離

3、群體分組分析法(BSA)篩選，得到6對與WMV抗性基因連鎖標記，10對與PRSV抗性基因連鎖標記，構(gòu)建相應(yīng)的連鎖圖，結(jié)果顯示抗性位點wmv和prsv均被定位在黃瓜六號染色體上，wmv兩側(cè)翼標記為SSR01566和UW016108，遺傳距離分別是6.4cM和3.9cM;prsv兩側(cè)翼標記為SSR18405和SSR33284，遺傳距離分別為7.1cM和10.6cM。
　　3、對黃瓜PRSV抗性基因初定位區(qū)域進行加密，最終將prsv位點

4、定位在標記SSR11-177和SSR11-1之間，遺傳距離分別是1.1cM和2.9cM，物理距離為602.9kb。在35份材料中對SSR11-177進行驗證，驗證準確率為82.9％。
　　4、通過構(gòu)建F2大群體，對黃瓜WMV抗性基因進行精細定位，最終將黃瓜WMV抗性基因定位在標記CAPS-W1和SSRWMV60-23之間，其與wmv位點的連鎖距離分別為1.19cM和0.34cM，物理距離為134.7kb。并在70份遺傳背景不同的黃

5、瓜材料中，對標記SSRWMV60-23準確性進行驗證，準確率為94.3％。
　　5、利用生物信息學技術(shù)對WMV定位區(qū)域進行基因預(yù)測，結(jié)果表明在WMV定位區(qū)間內(nèi)共預(yù)測到21個基因，具有基因注釋的16個，其中4個與抗病相關(guān)。
　　6、分別采集P1、P2、F1接種WMV后0h、16h、40h、3.5d、5.5d、8d不同時間點的葉片，并設(shè)有相應(yīng)對照與重復(fù)，提取RNA，對上述4個WMV抗性的候選基因進行熒光定量分析，結(jié)果顯示，在接種