肥胖相關(guān)性腎小球病腎組織脂氧素A4受體的變化及意義.pdf

1、目的：
　　肥胖相關(guān)性腎小球病(ORG)是肥胖患者一種少見的腎臟并發(fā)癥。近年來，隨著肥胖患者日益劇增，ORG的發(fā)病率也持續(xù)增高，并可進(jìn)展至終末期腎病(ESRD)。ORG的發(fā)病機(jī)理目前尚不十分清楚，可能是多種因素相互作用所致。最新研究認(rèn)為肥胖導(dǎo)致的慢性炎癥與ORG的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。脂氧素A4受體(ALX)是人體內(nèi)最重要的內(nèi)源性脂質(zhì)抗炎介質(zhì)——脂氧素A4(LXA4)的主要受體，激活后能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)LXA4，發(fā)揮抑制炎癥反應(yīng)、促進(jìn)炎癥消退的

2、雙重生物效應(yīng)。而ALX在人、小鼠和大鼠之間具有高度同源性。目前國內(nèi)外尚未檢索到利用ALX或LXA4治療腎臟疾病的相關(guān)報(bào)道。因此，通過轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研究，比較動物模型試驗(yàn)和人體臨床研究，可以加快ALX相關(guān)新藥的研發(fā)和應(yīng)用速度。本實(shí)驗(yàn)通過觀察ORG患者腎組織中ALXmRNA及蛋白的表達(dá)，探討其在ORG發(fā)生發(fā)展中的作用。
　　方法：
　　選取2010年2月至2014年3月期間于中國醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院及附屬盛京醫(yī)院住院治療并經(jīng)腎活檢確診

3、的12例ORG患者為病例組，其中男9例，女3例，年齡(46±5.0)歲。選取上述兩院2009年9月至2014年5月外科經(jīng)腎活檢確定為正常腎組織的10例非肥胖癥患者為對照組，其中男8例，女2例，年齡(48±4.2)歲。所有入選病例入院時常規(guī)問病史，測量身高、體重、腰圍、血壓，次日清晨空腹采血檢測血生化全項(xiàng)，留取新鮮晨尿檢測尿常規(guī)、尿微量蛋白，留取24h尿檢測尿蛋白定量。所留取腎組織標(biāo)本部分置于經(jīng)焦炭酸二乙酯處理過的EP管中，立即轉(zhuǎn)移至-8

4、0℃冰箱凍存待檢;其余分別至于2.5％戊二醛及4％多聚甲醛溶液中進(jìn)行病理檢測。采用實(shí)時定量聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)法檢測兩組標(biāo)本腎組織ALX mRNA表達(dá)，目的基因ALX及內(nèi)參GAPDH引物由上海生工生物工程公司根據(jù)GenBank的基因cDNA序列合成，逆轉(zhuǎn)錄試劑盒購于日本TaKaRa公司，熒光定量實(shí)時PCR儀(500型）及SYBR Green PCR Master mix試劑盒購于美國AppliedBiosystems公司;同時

5、采用Western blot法檢測兩組標(biāo)本腎組織ALX蛋白表達(dá)，蛋白抽提試劑盒購于美國Sigma公司，兔抗人ALX多克隆抗體（1∶1000稀釋）及辣根過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗兔第二抗體（1∶1000稀釋）購于美國Santa Cruz公司，凝膠圖像分析系統(tǒng)購于美國gene公司。均嚴(yán)格按照試劑盒及儀器使用說明書進(jìn)行操作。結(jié)果采用SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果：
　　與對照組比較，病例組腎組織中ALXmRNA及蛋白的